AKTA avant

mAb 纯化的快速工艺开发

AKTA avant 25 系统可用来开发单克隆抗体 (mAb) 的两步层析纯化工艺。使用基于Protein A 的MabSelect SuRe 层析填料用于最初的捕获步骤，而多模式阴离子交换填料 Capto adhere 用于在第二步的精纯中减少杂质。下表总结了纯化的方法开发步骤。

步骤

目标

层析柱

1 

确定 MabSelect SuRe 上的洗脱 pH 

HiScreen MabSelect SuRe 

2 

使用 MabSelect SuRe 确定动态结合载量

HiTrap MabSelect SuRe 

3 

在 MabSelect SuRe 上纯化 mAb 

HiScreen MabSelect SuRe 

4 

准备Capto adhere ( 放大 ) 材料

XK 50/20，使用 MabSelect SuRe 填料装填

5 

确定 Capto adhere 填料的上样条件

HiScreen Capto adhere 填料

6 

使用 DoE 方法在 Capto adhere 填料

上筛选上样条件

HiTrap Capto adhere 填料

7 

使用 DoE 方法研究 Capto adhere 填料的稳健性

HiTrap Capto adhere 填料

确定洗脱液的 pH 和动态结合载量后，在 HiScreen MabSelect SuRe 层析柱上纯化 mAb ，回收率为 99% ( 捕获步骤，数据未显示 ) 。对于精纯步骤，使用 DoE 方法通过改变以下因子来优化上样条件：样品的 pH、电导率和上样量。这些因子与 mAb 样品中的杂质 ( 如宿主细胞蛋白、抗体二聚体和多聚体等 ) 水平相关，需要优化以确定最佳的上样条件。优化后，使用 DoE 方法进行稳健性研究，以确认工艺条件是否稳健。