聚丙烯酰氨凝胶电泳

 polyacrylamide gel electrophoresis

，简称

PAGE

）

作用：用于分离蛋白质和寡核苷酸。

作用原理：聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非

变性聚丙烯酰胺凝胶

电泳

（

Native-PAGE

）

及

SDS

-

聚丙烯酰胺凝胶

（

SDS-PAGE

）

；

非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据

蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的

电荷量

而逐渐呈梯度分开。

而

SDS-PAGE

仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由

shapiro

于

1967

年建立，他们发现在样品介质和

丙烯酰胺凝胶

中加入离子去污

剂和强

还原剂

（

SDS

即十二烷基磺酸钠）后，蛋白质亚基的

电泳迁移率

主要取决

于亚基分子量的大小（可以忽略电荷因素）。

编辑本段

作用

SDS

是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢

键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强

还原剂

如

巯基乙醇

，

二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的

二硫键

断裂。在

样品

和凝胶中加入

还原剂

和

SDS

后，分子被

解聚

成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和

SDS

结合成蛋白

- SDS

胶

束

，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的

电荷量

，这样就消除了不同分子间的

电荷差异和结构差异。

SDS-PAGE

一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的

分辨率

。

浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓

缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和

浓缩胶选

TRIS/HCl

缓冲液，电极液选

TRIS/

甘氨酸。电泳开始后，

HCl

解离成氯

离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极

移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳

动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低

电导

区，而

电场强度

与低电导区成反

比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定

的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。

此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷

和分子形状无关。