Loading Buffer｜遺伝子工学研究用試薬｜ニッポンジーン

2024-07-13 01:39| 来源: 网络整理| 查看: 265

ホーム会社概要採用情報お問い合わせ ENGLISH 遺伝子工学研究用試薬トップ製品情報製品一覧・SDS キャンペーン Loading Buffer 電気泳動関連バッファー品名 Code No. 包装単位価格備考 Loading Buffer 313-90111 10 ml 4,000円 6 x Loading Buffer Triple Dye 314-90261 1 ml x 3 4,000円 6 x Loading Buffer Double Dye 313-90351 1 ml x 3 4,000円 6 x Loading Buffer Orange G 317-90251 1 ml x 3 4,000円

製造元　(株)ニッポンジーン

表示価格は希望納入価格 (税別) です。

製品説明製品内容使用例Q & A資料 Data Sheet関連情報問い合わせ先製品説明

ローディングバッファーは、電気泳動用核酸サンプルを調製する際に添加する試薬です。ローディングバッファーには、アプライの際にウェル（ゲルの穴）の中にDNAサンプルが沈むよう比重を増やすためのグリセロールまたはフィコールと、電気泳動の進行を観察できる色素が含まれています。色素は、種類によって流れる速度が異なります。

Loading Buffer

試料容量に対して1/5～1/10量加えて使用します。2種の色素（ブロモフェノールブルーとキシレンシアノール）とGlycerolが入っています (上図①) 本品にはSDSが含まれているため、DNAと結合タンパク質（Taq MutSなど）の電気泳動パターンに影響することがあります。一方、酵素反応を終了させたい場合や、タンパク質量が多い試料溶液の場合にはSDSが含まれている方が泳動度への影響が少なくなります。

6 x Loading Buffer (Orange G, Double Dye, Triple Dye)

試料容量に対して1/6量加えて使用します。Triple Dyeは色素として、泳動物のほぼ先端を確認できるOrange G、Bromophenol Blue（BPB）、高分子の泳動度を確認できるXylene Cyanol FF（XC）を採用しています。 (上図④) Orange GやDouble Dye では、BPBを使用しないことで、写真撮影時にはゲル中央部に色素影の無いUV写真を撮影することができます。 (上図②、③) 比重添加剤にはFicoll® PM400を使用しており、グリセロールに比べてバンドのスマイリングが起こりにくくなっています。

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製品内容 Loading Buffer 構成品容量保存備考 Loading Buffer 10 ml x 1 室温 0.02%(w/v) Bromophenol Blue, 0.02%(w/v) Xylene Cyanol FF, 50%(v/v) Glycerol, 1%(w/v) SDS 6 x Loading Buffer Triple Dye 構成品容量保存備考 6 x Loading Buffer Triple Dye 1 ml x 3 室温 0.3%(w/v) Orange G, 0.03%(w/v) Bromophenol Blue, 0.03%(w/v) Xylene Cyanol FF, 15%(w/v) Ficoll® PM400, 10 mmol/l Tris HCl(pH7.5), 50 mmol/l EDTA (pH 8.0) 6 x Loading Buffer Double Dye 構成品容量保存備考 6 x Loading Buffer Double Dye 1 ml x 3 室温 0.3%(w/v) Orange G, 0.03%(w/v) Xylene Cyanol FF, 15%(w/v) Ficoll® PM400, 10 mmol/l Tris HCl(pH7.5), 50 mmol/l EDTA (pH8.0) 6 x Loading Buffer Orange G 構成品容量保存備考 6 x Loading Buffer Orange G 1 ml x 3 室温 0.3%(w/v) Orange G, 15%(w/v) Ficoll® PM400, 10 mmol/l Tris HCl(pH7.5), 50 mmol/l EDTA (pH 8.0)

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使用例 6 x Loading Buffer の使用例 DNAサンプル溶液 10 µlに対して、6 x Loading Bufferを2 µl 加え、数回ピペッティングして混合します（12 μlになるよう必要に応じてTE(pH 8.0)を添加）。そのうち10 µl をアガロースゲルのウェルに静かに注入（アプライ）し、電気泳動を行います。泳動度対応表アガロースゲル Orange G Bromophenol Blue Xylene Cyanol FF 1% Agarose S 約 100 bp 約 900 bp 約 5,000 bp 2% Agarose S 約 30 bp 約 300 bp 約 1,500 bp 3% Agarose 21 約 10 bp 約 100 bp 約 500 bp 実験例1　電気泳動（写真撮影時の色素影の観察）

各サンプル（Marker 4　0.2µg/15µl、PCR産物　50ng/15µl、TE Buffer 15µl）に 6 x Loading Buffer を3µl加えて、写真撮影時に色素影を観察できるよう全量の18µlを3% Agarose21ゲルにアプライ後、100Vで30分間電気泳動を行った。EtBr入りバッファー（TAE Buffer 100mlに10mg/ml EtBrを5µl加えたバッファー）にゲルを浸したあと軽く振とうしながら10分間染色した。染色後のゲルを、水をいれたバットに移して浸し、15分から20分ほど放置して脱色させた後、撮影した。

電気泳動像（左）と、UV照射像（右） A: Xylene Cyanol FF（青色） B: Bromophenol Blue（紫色） C: Orange G（黄色）

Lane No. 泳動サンプルローディングバッファー 1 Marker 4(φX174/Hae III) 6 x Loading Buffer Triple Dye 2 6 x Loading Buffer Orange G 3 PCR産物(299 bp) 50 ng 6 x Loading Buffer Triple Dye 4 6 x Loading Buffer Orange G 5 TE Buffer (negative control) 6 x Loading Buffer Triple Dye 6 6 x Loading Buffer Orange G

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資料 Data Sheet 製品マニュアル Loading Buffer　製品説明書(PDF) 6 x Loading Buffer Double Dye　製品説明書(PDF) 6 x Loading Buffer Triple Dye　製品説明書(PDF) 6 x Loading Buffer Orange G　製品説明書(PDF) SDS(Safety Data Sheet) Loading Buffer　安全データシート(PDF) 6 x Loading Buffer Double Dye　安全データシート(PDF) 6 x Loading Buffer Triple Dye　安全データシート(PDF) 6 x Loading Buffer Orange G　安全データシート(PDF) 技術情報ゲル電気泳動マーカー色素移動度の目安

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関連情報バッファーの品質管理 D 電気泳動試験：Loading Buffer、各6 x Loading Bufferにおいて、通常の電気泳動が支障なく行えることを確認している。備考本品は試験研究用試薬です。医薬品の用途には使用しないでください。参考文献 Sambrook, J. et al. ：“Molecular Cloning”, A Laboratory Manual, 2nd ed.（1989）関連製品 10 X TAE 50 X TAE 5 X TBE EtBr Solution CLEAR STAIN Blue (安全な核酸染色用試薬) マーカー (電気泳動) Agarose (電気泳動) 問い合わせ先購入に関するお問い合わせ先富士フイルム和光純薬株式会社および同社代理店・特約店富士フイルム和光純薬株式会社　製品検索サイト製品に関するお問い合わせ先株式会社ニッポンジーン　学術営業課カテゴリー別製品リストに戻るバッファーマーカー、電気泳動

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