"那个"PCR已经折腾我半年了！

原标题："那个"PCR已经折腾我半年了！

做转基因克隆，最怕的就是PCR扩增失败！PCR扩增失败就无法获得目的基因，载体构建就无从谈起，转基因物种镜中水月，后续的表型分析及基因功能分析也没法进行。

实验一开始就失败，后续还怎么进行，这怎么能行！

我们的PCR为什么会失败？

根据聚合美多年超保真酶开发和售后经验，我们发现了PCR扩增失败的四个主要原因。

1

片段太长（＞3kb）

3kb以上的片段就算长片段了，普通Taq酶及其mix已经解决不，必须要上超保真酶。

2

模板选择不对（cDNA还是基因DNA？）

真核生物基因有内含子和外显子，因为基因功能由其基因编码序列（CDS）或者开放阅读框（ORF）决定的，在引物设计的时候通常会选择起始码子到终止子作为扩增片段。以cDNA做模板扩增得到基因编码序列（CDS），然而，由于RNA提取不好，存在部分降解导致反转录得到的cDNA模板截短，从而无法得到全长的CDS。这种情况下，只能扩增全长的基因组DNA来进行载体构建，而全长基因组DNA往往比全长CDS长很多，扩增难度一下子增加很大。

3

GC含量或者AT含量很高

长期进化的选择压力，不同物种基因组复杂程度不同。目的基因序列复杂程度不同，所用PCR扩增的条件也不同。某些物种（比如海洋褐藻和小球藻等）基因序列的 GC含量大于 70%，而杨树、松树、线虫等基因组 GC含量非常低，只有 25-30% 。如此复杂的基因片段，用普通的聚合酶非常难扩增成功，必须选择更强大的酶，并且摸索更复杂的PCR程序。

4

扩增得到很多杂带或者目的片段非常暗

目的片段也扩增出来了，但有很多非特异扩增，目的条带往往非常暗，怎么调整PCR程序也很难增加目的片段的亮度，使得后面做胶回收非常困难，这时亟需选择特异性强的酶。

“长又亮”Neo超保真酶，让您PCR一次就成功！

踌躇满志要在科研上大展身手的您怎能被小小的PCR挫伤士气！

针对以上问题，聚合美研发团队潜心打磨三年，历经上万次挫折，终于找到了解决长片段/ 复杂片段扩增的金钥匙---“长又亮”Neo超保真酶！

让您PCR一次就成功，拿下实验开门红！

“长又亮” Neo超保真酶（ MF947）是在聚合美高成功率PCR酶（ MF740 ）基础上添加了“延伸增强剂”和“抗 GC抑制剂”而精制而成的 PCR酶。其最大的改变在 PCRBuffer从原来的10x改为现在的 2x，让延伸增强剂和抗GC抑制剂能够得到充分的溶解，使其功能最大化。在保持超高速扩增速度的同时，进一步提高了对 粗提样品、长片段、高 GC或高 AT难扩增序列的扩增效率。

两大突出优点：

1

超强延伸性，更适合长片段扩增

A、最适合长片段扩增，以人基因组DNA为模板最大可扩增30kb的片段；对拟南芥、水稻等最大可以扩增20kb的片段。

B、实现了4-6kb/min的超高速循环（粗样品推荐2-3kb/min），极大缩短 PCR循环时间；

C、非常适合高GC/高AT片段的扩增，物种适应性更加宽泛，通吃所有物种。

2

非常适合粗提样品的扩增，与聚合美最佳扩增伴侣（MF859 ）完美搭配

A、提高了对农杆菌、酵母、植物裂解液和小鼠尾巴的扩增效率；

B、降低了环境样本，比如土壤、食品中各种抑制物的阻碍；

C、对多糖多酚（烟草、番茄、马铃薯等）都有较好的扩增。

实验案例（客户实验反馈图）：

1

扩增拟南芥基因组DNA（ 8.5kb）和水稻基因组 DNA（ 8kb）

1-4拟南芥基因组DNA为模板； 5-8水稻基因组DNA为模板

2

扩增水稻高GC基因组 DNA（ 1.8kb）、质粒全长 DNA（ 9kb）

1-2水稻基因组DNA为模板；3-6质粒DNA为模板

“长又亮”Neo超保真酶春季促销活动火热进行中！

●限时五折优惠

●五折基础上“买二赠一”，买超保真酶(MF947-01)两支送 抗体法qPCR mix 5ml (MF013/MF787)，买超保真酶mix(MF743-01)两支送 二代胶红核酸染料 (MF079-plus-01 )一支！

温馨提示：

● 扩增超过10kb的目的片段时，推荐使用OPC以上纯化级度，27mer以上的引物。另外，3 端有错配的引物，可能会受到本酶校正。

● “长又亮”超保真酶PCR产物的克隆：由于本酶的PCR产物已被平滑化，可用平末端克隆法进行克隆。利用聚合美平末端TOPO载体MF021 ，可以直接转化DH 5a ，得到阳性克隆。

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