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几种不同DNA聚合酶比较

2023-04-27 12:41| 来源: 网络整理| 查看: 265

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合理选择耐热

DNA

聚合酶是

PCR

成败与否的一个关键因素,如何选择最合适的耐热

聚合酶,是进行

PCR

实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热

DNA

聚合酶,虽然

名称各不相同,但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个

指标。

 

 

 

Taq DNA

聚合酶

 

 

 

 

 

存在于水生嗜热菌

(Thermus aquaticus)

的嗜热

DNA

聚合酶,

可在

74

℃复制

DNA

95

仍具有酶活力。该酶可在离体条件下,以

DNA

为模板,延伸引物,合成双链

DNA

。这个

酶只有

5

′→

3

DNA

聚合酶活性和

5

′→

3

′的外切酶活性,缺少

3

′→

5

′的外切酶活性,

即具有

5

-3

DNA

聚合酶活性和对双链

DNA

特异的

5

-3

’外切核酸酶活性,无

3

-5

外切酶活性。使用该产品扩增得到的

PCR

产物的

3

’末端附有一个“

A

”碱基,可直接用于

TA

克隆。由于不具有

3'-5'

外切酶活性,因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。

 

 

 

 

 

TaqDNA

聚合酶还具有非模板依赖性活性,可将

PCR

双链产物的每一条链

3'

加入单核

苷酸尾,故可使

PCR

产物具有

3'

突出的单

A

核苷酸尾;另一方面,在仅有

dTTP

存在时,

它可将平端的质粒的

3'

端加入单

T

核苷酸尾,产生

3'

端突出的单

T

核苷酸尾。应用这一特

性,可实现

PCR

产物的

T-A

克隆法。

 

适用于:

 

普通

PCR

TA

克隆

 

 

 

Super Taq DNA

聚合酶

 

 

 

 

 

Super Taq DNA

聚合酶是由耐热的

Taq DNA

聚合酶和具有

3

-5

’外切酶活性的高保真

DNA

聚合酶按照最合适的比例混合而成,具有扩增效率高和错配率低的优良性能,使用该

产品扩增得到的

PCR

产物的

3

’末端附有一个“

A

”碱基,可直接用于

TA

克隆。

 

适用于:要求效率高保真性好的

PCR

反应。

 

 

UlltraPF

 

DNA

聚合酶

 

 

 

 

 

UlltraPF

 

DNA Polymerase

是一种耐热的超保真

DNA

聚合酶,

具有

5

-3

聚合酶活性

3

-5

’外切酶活性,具有比

Pfu DNA Polymerase

更好的保真性能和更快的扩增效率。使

用该产品扩增得到的

PCR

产物为平滑末端,可直接克隆于平滑末端载体中。

 

 

 

LA Taq DNA 

聚合酶

 

 

 

 

 

LA Taq DNA polymerase

是一种具有

5'-3

DNA

聚合酶活性和

3'-5'

校对活性的聚合酶,

可用于扩增较长的富含

GC

的片段。作为具有

3'-5'

校对活性的且热稳定性最强的

DNA

聚合

酶之一,

该酶可在最佳温度

75

℃)

催化

DNA

合成,

且错配率低

(准确率约是标准

Taq DNA 

polymerase

10

倍)

。该酶可扩增人基因组

DNA

长达

17.5 

kb

的片段和λ

DNA

长达

20 

kb

的片段。在较长的

PCR

扩增中应用

LApro Taq DNA polymerase

可减少拖尾效应,实际上减

少背景影响。

LA Taq DNA polymerase

扩增产物带有

A

尾可用于

T-A

克隆。

 

LA Taq DNA

聚合酶的应用:

 

 

 

 

 

LA Taq DNA polymerase

可应用于许多方面:扩增人基因组中长达

20 kb

的片段;高忠

实度扩增;比普通

Taq

聚合酶更稳定;

T-A

克隆;定点突变;片段分析。

 

 

 

Tth DNA

聚合酶

 

 

 

 

 

Tth 

DNA

聚合酶是一种热稳定性酶,分子量为

92kDa

,从

Thermus 

thermophilus 

HB-8



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