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合理选择耐热 DNA 聚合酶是 PCR 成败与否的一个关键因素,如何选择最合适的耐热 聚合酶,是进行 PCR 实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热 DNA 聚合酶,虽然 名称各不相同,但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个 指标。
Taq DNA 聚合酶
存在于水生嗜热菌 (Thermus aquaticus) 的嗜热 DNA 聚合酶, 可在 74 ℃复制 DNA , 在 95 ℃ 仍具有酶活力。该酶可在离体条件下,以 DNA 为模板,延伸引物,合成双链 DNA 。这个 酶只有 5 ′→ 3 ′ DNA 聚合酶活性和 5 ′→ 3 ′的外切酶活性,缺少 3 ′→ 5 ′的外切酶活性, 即具有 5 ’ -3 ’ DNA 聚合酶活性和对双链 DNA 特异的 5 ’ -3 ’外切核酸酶活性,无 3 ’ -5 ’ 外切酶活性。使用该产品扩增得到的 PCR 产物的 3 ’末端附有一个“ A ”碱基,可直接用于 TA 克隆。由于不具有 3'-5' 外切酶活性,因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。
TaqDNA 聚合酶还具有非模板依赖性活性,可将 PCR 双链产物的每一条链 3' 加入单核 苷酸尾,故可使 PCR 产物具有 3' 突出的单 A 核苷酸尾;另一方面,在仅有 dTTP 存在时, 它可将平端的质粒的 3' 端加入单 T 核苷酸尾,产生 3' 端突出的单 T 核苷酸尾。应用这一特 性,可实现 PCR 产物的 T-A 克隆法。
适用于:
普通 PCR , TA 克隆
Super Taq DNA 聚合酶
Super Taq DNA 聚合酶是由耐热的 Taq DNA 聚合酶和具有 3 ’ -5 ’外切酶活性的高保真 DNA 聚合酶按照最合适的比例混合而成,具有扩增效率高和错配率低的优良性能,使用该 产品扩增得到的 PCR 产物的 3 ’末端附有一个“ A ”碱基,可直接用于 TA 克隆。
适用于:要求效率高保真性好的 PCR 反应。
UlltraPF ™
DNA 聚合酶
UlltraPF ™
DNA Polymerase 是一种耐热的超保真 DNA 聚合酶, 具有 5 ’ -3 ’ 聚合酶活性 和 3 ’ -5 ’外切酶活性,具有比 Pfu DNA Polymerase 更好的保真性能和更快的扩增效率。使 用该产品扩增得到的 PCR 产物为平滑末端,可直接克隆于平滑末端载体中。
LA Taq DNA 聚合酶
LA Taq DNA polymerase 是一种具有 5'-3 ’ DNA 聚合酶活性和 3'-5' 校对活性的聚合酶, 可用于扩增较长的富含 GC 的片段。作为具有 3'-5' 校对活性的且热稳定性最强的 DNA 聚合 酶之一, 该酶可在最佳温度 ( 75 ℃) 催化 DNA 合成, 且错配率低 (准确率约是标准 Taq DNA polymerase 的 10 倍) 。该酶可扩增人基因组 DNA 长达 17.5 kb 的片段和λ DNA 长达 20 kb 的片段。在较长的 PCR 扩增中应用 LApro Taq DNA polymerase 可减少拖尾效应,实际上减 少背景影响。 LA Taq DNA polymerase 扩增产物带有 A 尾可用于 T-A 克隆。
LA Taq DNA 聚合酶的应用:
LA Taq DNA polymerase 可应用于许多方面:扩增人基因组中长达 20 kb 的片段;高忠 实度扩增;比普通 Taq 聚合酶更稳定; T-A 克隆;定点突变;片段分析。
Tth DNA 聚合酶
Tth DNA 聚合酶是一种热稳定性酶,分子量为 92kDa ,从 Thermus thermophilus HB-8 |
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