IL

人白介素

6

（

IL-6

）试剂盒的操作说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：

96T 

0-8ng/L 

使用目的

:

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白介素

6

（

IL-6

）含量。

实验原理

:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素

6

（

IL-6

）水平。用纯化的人白介

素

6

（

IL-6

）

抗体包被微孔板，

制成固相抗体，

往包被单抗的微孔中依次加入白介素

6

（

IL-6

）

，

再与

HRP

标记的白介素

6

（

IL-6

）

抗体结合，

形成抗体

-

抗原

-

酶标抗体复合物，

经过彻底洗涤

后加底物

TMB

显色。

TMB

在

HRP

酶的催化下转化成蓝色，

并在酸的作用下转化成最终的黄

色。颜色的深浅和样品中的白介素

6

（

IL-6

）呈正相关。用酶标仪在

450nm

波长下测定吸光

度（

OD

值）

，通过标准曲线计算样品中人白介素

6

（

IL-6

）浓度。

试剂盒组成

1.30

倍浓缩洗涤液

20ml

×

1

瓶

7

终止液

6ml

×

1

瓶

2.

酶标试剂

6ml

×

1

瓶

8

标准品（

16ng/L

）

0.5ml

×

1

瓶

3.

酶标包被板

12

孔×

8

条

9

标准品稀释液

1.5ml

×

1

瓶

4.

样品稀释液

6ml

×

1

瓶

10

说明书

1

份

5.

显色剂

A

液

6ml

×

1

瓶

11

封板膜

2

张

6.

显色剂

B

液

6ml

×

1/

瓶

12

密封袋

1

个

标本要求

1

．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上

进行试验，可将标本放于

-20

℃保存，但应避免反复冻融

2

．不能检测含

NaN3

的样品，因

NaN3

抑制辣根过氧化物酶的（

HRP

）活性。

操作步骤

1.

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行

稀释。

8ng/L5

号标准品

150

μ

l

的原倍标准品加入

150

μ

l

标准品稀释液

4ng/L4

号标准品

150

μ

l

的

5

号标准品加入

150

μ

l

标准品稀释液

2ng/L3

号标准品

150

μ

l

的

4

号标准品加入

150

μ

l

标准品稀释液

1ng/L2

号标准品

150

μ

l

的

3

号标准品加入

150

μ

l

标准品稀释液

0.5ng/L1

号标准品

150

μ

l

的

2

号标准品加入

150

μ

l

标准品稀释液

2.

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样

50

μ

l

，待测样品孔中先加样品稀释液

40

μ

l

，

然后再加待测样品

10

μ

l

（

样品最终稀释度为

5

倍）

。

加样将样品加于酶标板孔底部，

尽量不

触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.

温育：用封板膜封板后置

37

℃温育

30

分钟。

4.

配液：将

20

倍浓缩洗涤液用蒸馏水

20

倍稀释后备用

5.

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置

30

秒后弃去，如此重

复

5

次，拍干。

6.

加酶：每孔加入酶标试剂

50

μ

l

，空白孔除外。

7.

温育：操作同

3

。

8.

洗涤：操作同

5

。