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Author:JunfeiXie Date:10/03/2022 1. 胰酶消化/离心标准操作:T25细胞培养瓶总体积约为5ml,贴壁细胞经过胰蛋白酶(1-2 ml)消化后加入含血清培养基中和,补足至5ml,按照1:2、1:3、1:4、1:5、1:6比例传代,则相应的体系为: 图片.png关于细胞转染: 细胞铺板后至汇合度达到80%以上,即可进行转染,适当增加细胞数量可在铺板后8-12小时进行转染; 用去内毒素试剂盒提取质粒DNA,mimic终浓度在50nM-100nM之间,最终DNA含量为质粒DNA+mimic的含量,控制在1000ng以内,推荐脂质体1.5ul,若毒性大可适当减少用量,转染6-8h更换为正常培养基,继续培养24h-36h后收获细胞,用于双荧光素检测; 针对24孔板,加入脂质体复合物体积为100ul,覆盖住细胞表面,转染后吸弃再加入500ul新鲜培养基; 若用其他无需去血清转染试剂,可以省略换液操作,加入转染复合物后直接加入培养基。 2. 快速传代(免离心)操作:按照1:2、1:3、1:4、1:5、1:6比例传代,在加入胰蛋白酶(1-2 ml)消化,然后倾斜培养瓶,用枪头吹打瓶底面积2/3,3/4,5/6,6/7区域,之后吸走胰蛋白酶和细胞溶液,加入5ml含血清培养基,并继续吹打剩余部分细胞。 注意:控制好消化时间( |
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