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保存：-20℃ 产品储存：-20℃保存，一年有效。 产品组成： 产品说明： GUS能与4-MUG反应产生荧光物质4-MU。4-MU的激发波长为365nm，发射波长为456nm。其含量可由荧光分光光度计测出。因此，我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量的检测GUS的含量。 荧光分光光度计测定的是相对值，因此用荧光分光光度计测定时必须用标准物4-MU进行校准。 使用方法： 一、植物总蛋白提取 1.取新鲜的植物组织100mg左右，用液氮将材料急速冷冻，然后采用液氮研磨的方式在研钵里磨碎组织。如果无法立即研磨，可以先将液氮冷冻处理的植物组织储存于-80℃冰箱。 2.将研磨破碎的组织转到EP管里，并立即加入1mL的提取液，充分混匀。 3.12 000rpm，4℃离心10min。 4.将上清转至另一洁净的EP管，12000rpm，4℃离心10min。 5.所得上清即为蛋白提取物，可以置于冰上待用，或者-80℃保存。 二、蛋白浓度的测定(Bradford法) 参照本公司产品Bradford蛋白浓度测定试剂盒(KD3027)使用说明书。 三、标准溶液配制 用终止液稀释4-MU，建议稀释至浓度1～10μM，即为标准液(避光放置)。用于标准曲线绘制。 四、GUS表达水平的定量测定 1.在3个1mL的离心管中分别加入900μL的终止液，置于37℃温浴。 2.取150μL蛋白提取物，加入150μL 4-MUG底物液，37℃温浴，即为反应液。 3.分别在10min，20min，30min时，从上述反应体系中，取100μL加入步骤1中温浴的900μL终止液中，避光放置直至测量结束。 4.用标准液的荧光值校准反应液中生成的4-MU的荧光值。 5.计算GUS的活性MU/min/μg总蛋白。 五、计算举例： 1.蛋白定量需要做一个标准曲线Y=kx。x可以设为蛋白浓度，Y为吸光值。然后测出来的样品吸光值为Y1，计算出x1=xmg/mL=xμg/μL； 2.MU定量需要做一个标准曲线M=kn，x可以设为4-MU的浓度，M为荧光值。然后测出来的荧光值为M1(T1=10min)，M2(T2=20min)。计算出来n1=n1μM，n2=n2μM； 3.酶活定量是个动态变化。依据酶活定义，单位时间内水解底物生成产物的量MU/min/μg； 4.酶活计算方法。其中MU=(n2-n1)μmol/L=(n2-n1)nmol/μL；min=T2-T1=10min；μg=100/(150+150)×150/1000×xμg/μL=1/20xμg/μL； 5.所测样品中GUS的活性=(n2-n1)nmol/μL/10min/(1/20xμg/μL)=2(n2-n1)/x nmol/min/μg； 6.解释为每μg总蛋白每min可以水解底物产生2(n2-n1)/x nmol的4-MU。相关搜索：GUS基因定量检测试剂盒，GUS gene quantitative detection Kit
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