蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB ）怎样选择内参蛋白？

三、定位

不同表达部位内参蛋白不同

四、样品前处理（常常被忽略的内参选择因素）

内参的选择还需要考虑实际的实验环境和样品的前处理。在某些特殊条件下，一些内参蛋白的表达也不是绝对稳定的，会发生变化，也就是我们常说的，内参不齐。

下面我们来看下不同内参的适用环境：

【Actin】肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，其余两种广泛分布于各种组织中，包括 β-actin和γ-non-muscle actin。β-actin广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富，其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下，如脂肪组织，β-actin的表达量就很少，此时β-Actin就不再适用于这些样本的内参。

【Tubulin】微管蛋白，是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin，其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成异源二聚体，是形成微管的最主要的两种Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa，其实际检测条带均在55kDa左右。作为内参，β-tubulin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于WB时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。

【GAPDH】甘油醛-3-磷酸脱氢酶，是参与糖酵解的一种关键酶，催化糖酵解的第六步,它还参与核转录等事件,核糖核酸转录、DNA复制和修复以及细胞凋亡。由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作WB的内参。在某些生理因素，如缺氧和糖尿病，会增加GAPDH在特定的细胞和组织的表达，如出现这类的样品，尽量避免选择GAPDH作为内参。

注意事项

1.内参的选择要根据具体的样本情况选择，没有一种内参能适用所有的组织和细胞样本。

2.内参蛋白应不受实验处理的影响，建议根据文献选择在特定细胞、特定状态下较稳定的内参；或者是同时做多个内参条带，再行选择。

3.上样前需要进行BCA实验测定蛋白浓度，以保持上样量一致。

好，本篇的内容就到这里

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以前怕写的不好，不好意思要关注，现在不一样了，现在脸皮厚了

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