磷酸化特异性ELISA试验方案

“PhosphoELISA”试剂盒是磷酸化特异性夹心ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒，可以定量测量细胞内的蛋白质。磷酸化特异性ELISA试剂盒可以在信号研究中用于测量磷酸化、修饰、切割位点特异性和总蛋白。有关更多详情，请访问我们的磷酸化特异性ELISA页面。

我们提供各种Thermo Scientific Pierce和Novex磷酸化特异性试剂盒，包括STAT3、CREB、PRAS40、p38、AMPK alpha、PTK2和Caspase 3信号。 这些试剂盒均经过验证并且具有很高的质量和重现性。 这些试剂盒符合灵敏度、动态范围、精密度、特异性、回收率和批次间一致性等质量控制规范。请参见ELISA选择工具部分，找到满足您的研究需求的试剂盒。

ELISA方法是抗原定量的一个基准。ELISA适用于高通量筛选，因为其结果获得快速、一致且相对容易分析。利用高度纯化、预先匹配的捕获和检测抗体，通过夹心方式获得最佳结果。产生的信号可提供非常灵敏且具有高度特异性的数据。

磷酸化特异性方案（图1）始于包被在微孔板孔上的靶蛋白特异性捕获抗体。将样品（包括含有目标蛋白的标准品、对照样品和未知物）移至孔中。在第一次孵育期间，蛋白抗原与捕获抗体结合。洗涤后，向孔中加入检测抗体，该抗体与第一次培养过程中捕获的固定蛋白结合。除去多余的检测抗体后，加入酶联（即辣根过氧化物酶）二次抗体并与检测抗体结合。在第三次孵育和洗涤以除去多余二次级抗体后，加入底物溶液，并通过酶反应转化为可检测的形式（颜色信号）。该有色产物的强度与原始标本中抗原的浓度成正比。Thermo Scientific Pierce和Novex磷酸化特异性试剂盒旨在进行磷酸化特异性检测，具有很高的特异性，并与蛋白免疫印迹数据密切相关。

图 1.典型磷酸化特异性方案我们的即用型磷酸化特异性ELISA试剂盒配有标准品、检测抗体、辣根过氧化物酶偶联物、显色底物和终止液，可完成上述所有步骤。

注释：所提供的方案是多数磷酸化特异性即用型ELISA试剂盒的代表性方案。各个试剂盒的方案可能有所不同。本通用方案可能需要根据目标蛋白、抗体、缓冲液或使用的底物进行优化。有关更多详情，请参见ELISA概述和ELISA开发和优化部分。

运行时间：4小时— 30分钟手动操作时间。 注释：每次定量分析都必须添加标准曲线。

注释：在细胞提取缓冲液中制备的样品必须使用稀释缓冲液按1:10或更高比例稀释。所选择的稀释度应针对每个实验系统进行优化。

注释：无论您采用何种洗涤方法，(洗瓶或自动洗板机）向孔中注入至少400 µL经稀释的洗涤缓冲液。浸泡15到30秒，然后倒出液体。重复。所有后续洗涤步骤均使用此方法。

注释：如果使用抗体对试剂盒来构建自己的ELISA，您需要自行将捕获抗体包被在96孔微孔板上。该过程将需要：一个96孔微孔板、捕获抗体和封闭缓冲液（通常是BSA或稀释在PBS中的牛奶）。在开始上述方案之前，请遵循以下步骤：

Thermo Scientific Pierce和Novex磷酸化特异性ELISA试剂盒经过高级测试和验证。以下是通过我们最常卖试剂盒获得的数据。有关我们磷酸化特异性ELISA试剂盒系列产品的更多详情，请访问我们的磷酸化特异性ELISA试剂盒页面。

仅供科研使用，不可用于诊断目的。