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2023-08-04 00:29| 来源: 网络整理| 查看: 265

3.1 圆环(PCV-2)抗体检测

执行标准为SNT2708-2010,以瑞普的检测盒为例,圆环抗体检测实验成立条件:阴性对照OD450平均值≤0.25,阳性对照OD450平均值≥0.8。

S/P值的计算:

S/P值=(待检样本OD450-阴性对照OD450均值)/(阳性对照OD450均值-阴性对照OD450均值)

检测结果判定:

S/P值≥0.25为阳性;

S/P值≤0.16为阴性;

0.16<S/P值<0.25判为可疑(注:可疑区间的样品重复检测一次,如样品S/P值仍在可疑区间内,判定为PCV-2抗体阴性)。

如表1,母猪、公猪和后备猪在没有做疫苗情况下,OD450nm平均值均高于 0.8,而且阳性率均达 100%,说明野毒感染十分严重。但实际生产中,猪场后备母猪表现圆环病毒导致的皮炎,而母猪公猪未见典型的症状。

表1 圆环抗体检测结果

原始编号 样品数量 平均值 阳性率 离散度 经产母猪 10 0.979 100% 26.90% 公猪 2 0.875 100% 后备母猪 4 0.865 200%

3.2 蓝耳(PRRS)抗体检测

蓝耳抗体检测根据采用试剂盒不同,获取样本不同的OD值,然后根据相应公式计算得出不同的抗体结果值,如S/P值、S/N值、IRPC值,常见为S/P值。

S/P值检测

以爱德士检测盒为例,抗体检测实验成立条件:阳性对照OD650平均值—阴性对照OD650平均值≥0.150,并且阴性对照OD650平均值≤0.150。

计算公式:

S/P值=(待检样本OD650-阴性对照OD650均值)/(阳性对照OD650均值-阴性对照OD650均值)

检测结果判定:

S/P值<0.40,样品判定为抗体阴性;

S/P值≥0.40,样品判定为抗体阳性。

如表2,1、2号样品蓝耳抗体S/P值为2.263和2.229,抗体结果阳性。

表2 蓝耳抗体检测结果

样品编号 (S/P) 备注 阴性对照值 0.046 0.047 阳性对照值 0.595 0.592 仔猪1 2.263 阳性 仔猪2 2.229 阳性

针对种猪而言,S/P值>2.5时需要引起重视;如果是公猪,暂停使用1-2个月或PCR确认感染状态;后备母猪则暂停入群;

针对商品猪而言,S/P值>2.5的比例超过5%,蓝耳不稳定,有野毒感染。

IRPC值检测:

以法国LSI检测盒为例,抗体检测实验成立条件:阳性对照的OD450平均值>0.6,阳性对照平均值/阴性对照平均值>4.0。

计算公式:

IRPC值=[(待检样本OD450 -阴性对照OD450均值)/(阳性对照OD450均值-阴性对照OD450均值)]*100

检测结果判定:

IRPC>20.0 时为阳性,说明达到了疫苗免疫的效果;

IRPC≤20.0时为阴性,应该及时进行补免。

3.3 猪瘟(CSF)抗体检测

猪瘟抗体检测有三个概念:阻断率、抗体阳性率与免疫合格率。

以爱德士检测盒为例,抗体检测实验成立条件:阴性对照OD450平均值>0.500,阳性对照的阻断率>50%。

阻断率计算公式:

阻断率=[(阴性对照OD450均值-待检样本OD450)/阴性对照OD450均值]*100%

检测结果判定:

抗体阻断率(Blocking)≥40%,判为阳性结果(有抗体存在);

抗体阻断率≤30%,判为阴性结果(无抗体存在);

30%<抗体阻断率<40%,判为可疑结果(需数日后重测)。

免疫阳性率:

抗体阳性的猪占阳样品群体比例

免疫合格率:

免疫合格的猪占样品群体比例。猪瘟阻断率≥50%,即为免疫合格(断奶仔猪猪瘟第一次免疫受母源抗体干扰,猪瘟阻断率≥30%可视为合格)。阳性率与免疫合格率的标准不同。

如表3,1、2号样品猪瘟抗体阻断率为57%和74%,抗体结果阳性。

表3 猪瘟抗体检测结果

样品编号 阻断率 备注 阴性对照值 1.659 1.657 阳性对照值 0.143 0.142 仔猪1 57% 阳性 仔猪2 74% 阳性

猪瘟免疫评估标准:

种猪群(公猪和母猪):猪瘟二免后4-6周检测抗体;标准:免疫合格率≥90%,CV(离散度,样本数量低于8头时离散度无意义)≤40%,表示猪群免疫效果较好,不同个体之间抗体水平稳定;

商品猪:猪瘟二免后4-6周检测抗体,标准:免疫合格率≥80%,CV(离散度)≤40%。

3.4 伪狂犬(PR)抗体检测gE/gB

伪狂犬抗体检测分为2类,一类检测gE抗体,gE抗体为野毒的标志,常见的gE缺失疫苗免疫后不产生gE抗体,因此gE抗体为阳性,表示感染野毒。

gE抗体检测:

以爱德士检测盒为例,抗体检测实验成立条件:阴性对照OD650平均值—阳性对照OD650平均值≥0.30。

S/N计算公式:

S/N=待检样本OD650/阴性对照OD450均值

检测结果判定:

S/N值≤0.60,判断为样品抗体阳性;

S/N值>0.70,判断为样品抗体阴性;

0.60<S/N值≤0.70,判断为样品可疑,需要重测或者过一段时间再测。

如表4,1、2号样品伪狂犬gE抗体S/N值为0.856和1.018,抗体结果阴性,无野毒感染。

表4 伪狂犬gE抗体检测结果

样品编号 (S/N) 备注 阴性对照值 1.211 1.21 阳性对照值 0.133 0.133 仔猪1 0.856 阴性 仔猪2 1.018 阴性

低感染群:种猪阳性率<10%,可做净化;高感染群,种猪阳性率10%-30%,可做净化;种猪阳性率>30%,通过疫苗控制,稳定猪群。

gB抗体检测:

判定标准与gE标准类同,不区分自然感染与疫苗免疫。

4. 横向检查

在免疫抑制现象普遍的今天,横向检查很必要。在一些个别样本出现猪瘟抗体、伪狂犬抗体不达标,号称免疫抑制元凶的蓝耳、圆环野毒感染同样没有,排除血样问题后,有可能是霉菌毒素的影响。

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