常用特殊染色和组织化学技术

基本理论

知识点1：特殊染色的含义

特殊染色是指与普通（常规）染色即苏木精和伊红（HE）染色相对而言的组织切片染色技术。它主要是利用组织和细胞对染料的亲和力、摄取及丢失速率等物理学特性的差异进行组织染色，从而显示正常和病理的组织与细胞中某些特定成分，如结缔组织、肌肉组织、神经组织、脂质、糖类、蛋白质和核酸、色素、淀粉样物、无机物、神经内分泌细胞胞质颗粒和其他细胞器、病原微生物、血液和淋巴组织以及骨和软骨组织等。

知识点2：组织化学技术的含义

组织化学技术主要是指在组织切片上显示组织和细胞中某些特殊化学成分的技术，利用无色的试剂与组织和细胞中某一成分发生化学反应，在原位生成有色沉淀的产物。

应用指征及分析判断

知识点1：三色染色的应用

目前最常用的是Masson三色染色法。三色染色主要用于区分胶原纤维与肌纤维及其他成分，包括以下几个方面：

⑴鉴别瘢痕组织与淀粉样物或纤维素。

⑵鉴别梭形细胞肿瘤为纤维源性还是肌源性或神经源性。

⑶证实早期肝硬化小叶之间有少量增生的胶原纤维。

⑷尸检时证实心肌梗死中的瘢痕灶。

知识2：网状纤维染色的应用

网状纤维染色可以用于证实网状纤维和基膜。网状纤维染色在病理学中的诊断与应用，具体见表。

序号

鉴别诊断

内容

1

癌与肉瘤

网状纤维围绕在癌细胞巢周围，而在大多数肉瘤中则围绕着每个瘤细胞

2

血管内皮瘤与血管外皮瘤

前者瘤细胞位于血管壁的网状纤维支架内，后者则位于血管壁的网状纤维支架外，网状纤维呈放射状包绕瘤细胞

3

淋巴结病变的良性和恶性

良性病变的网状纤维支架可清楚保留，而恶性淋巴瘤的网状纤维支架受挤压或破坏消失，淋巴结转移性癌则可见网状纤维围绕癌巢

4

中枢神经系统肿瘤

星形细胞瘤的瘤细胞和神经胶质中无网状纤维，脑膜瘤内网状纤维散布在肿瘤中，而转移性癌或肉瘤都有增生的网状纤维位于癌巢周围或瘤细胞之间

5

原位癌与早期浸润癌

前者基膜完整，后者基膜突破而消失，如同时做PAS染色则更容易判断

6

结核与结节病

增殖性结核无明显干酪样坏死，但病变内网状纤维减少或消失，而结节病肉芽肿内外的网状纤维仍保留或增多

7

肝疾病

慢性活动性肝炎轻度纤维化，网状纤维增加，而在其坏死灶内网状纤维支架破坏崩解，胶原纤维增加；慢性淤血性肝硬化可显示中央静脉与小叶下静脉周围网状纤维增生

8

其他

慢性肾病或糖尿病时肾活检可证实基膜显著增厚

知识点3：弹性纤维染色的应用

弹性纤维染色在病理学中的诊断与应用，具体见表。

序号

鉴别诊断

内容

1

弹性纤维瘤

HE切片上弹性纤维与胶原纤维不易区分，弹性纤维染色可清晰显示肿瘤内呈深蓝黑色球状、粗纤维状、串珠状和颗粒状的弹性纤维

2

乳腺导管癌的早期浸润

导管原位癌的导管和血管壁周围无弹性纤维增生，早期浸润则出现弹性纤维增生

3

弹性纤维增多症、弹性纤维性假瘤、萎缩性硬化性苔藓、皮肤松弛症及硬皮病

某些皮肤病的真皮内弹性纤维增生、卷曲、变性和崩解，见于弹性纤维增多症、弹性纤维性假瘤、萎缩性硬化性苔藓、皮肤松弛症及硬皮病等

4

心内膜与冠状动脉弹性纤维增多症

心内膜与冠状动脉弹性纤维增多症中弹性纤维异常增加，高血压肾病的肾血管内的弹性纤维层次增多

5

动脉粥样硬化和梅毒性主动脉炎

动脉粥样硬化和梅毒性主动脉炎时动脉壁弹性纤维灶性破坏、断裂和崩解，肾移植时血管内弹性板破裂提示对移植物排斥

6

慢性支气管炎、肺气肿、支气管扩张症

证实某些疾病如慢性支气管炎、肺气肿、支气管扩张症，黄韧带损伤时弹性纤维显示变性和破坏等改变

知识点4：高碘酸-雪夫（PAS）染色的应用

PAS染色法可以用于证实糖原、中性黏液、基膜、某些真菌和寄生虫等。

⑴证实含有糖原的肿瘤：如肝细胞癌、肾透明细胞癌、肺糖原瘤、卵巢透明细胞癌、透明细胞汗腺瘤、Brenner瘤、骨骼肌肉瘤及Ewing肉瘤等。

⑵证实糖原：证实糖原储积时在肝、心肌、骨骼肌、肾及单核巨噬细胞系统中大量堆积的糖原。

⑶显示糖原颗粒的沉积：显示糖尿病中多个脏器（肝、心肌及肾曲小管）内糖原颗粒的沉积。

⑷证实某些PAS阳性真菌：如白色念珠菌、荚膜组织胞浆菌、隐球菌和芽生菌等。

⑸鉴别空泡细胞内含糖原、脂质等：结合脂肪染色鉴别空泡细胞内含糖原、脂质或其他物质。

⑹证实早期癌有无基膜突破：结合银染法证实早期癌有无基膜突破及某些肾病中肾小球毛细血管基膜的明显增厚。

⑺诊断和鉴别PAS阳性的肿瘤：结合其他糖类染色法诊断和鉴别PAS阳性的肿瘤。

⑻证实心肌缺血导致心肌内糖原显著减少：心肌缺血导致心肌内糖原显著减少也可用PAS染色证实。

知识点5：磷钨酸苏木精（PTAH）的应用

磷钨酸苏木精染色主要应用于证实胞质内微丝，如存在于肌纤维和神经胶质细胞中的微丝。神经胶质、肌纤维、纤维素及胞核均呈紫蓝色，骨骼肌的横纹清晰可见，网状纤维、胶原纤维、软骨及骨呈玫瑰红色或黄色，弹性纤维呈微紫色。

知识点6：黏液染色的应用

黏液染色在病理学中的应用见表。

序号

鉴别诊断

内容

1

含黏液上皮性肿瘤

胃癌PAS阳性时提示为胃型胃癌，当PAS阴性而AB阳性时则提示在肠化生基础上发生的肠型胃癌

2

肾嫌色细胞癌

肾嫌色细胞癌对Hale胶体铁呈阳性反应（蓝色），能与其他类型肾细胞癌鉴别，后者均为阴性反应

3

含黏液的间叶性肿瘤

黏液瘤、黏液样脂肪肉瘤、黏液纤维肉瘤中的黏液为透明质酸，AB染色阳性，但先用透明质酸酶消化则染色反应转为阴性，骨外黏液样软骨肉瘤的黏液为强硫酸黏液，不能用此法消除AB染色阳性反应

4

脊索瘤、滑膜肉瘤与黏液表皮样癌、黏液腺癌

结合PAS染色和其他黏液染色可证实某些肿瘤如脊索瘤、滑膜肉瘤同时含有黏液和糖原，另一些肿瘤如黏液表皮样癌、黏液腺癌只含有黏液而无糖原

知识点7：中性脂肪染色的应用

⑴诊断和鉴别诊断脂肪肉瘤与皮脂腺肿瘤。

⑵鉴别卵泡膜瘤与卵巢纤维瘤，前者中性脂肪染色呈阳性，后者呈阴性。

⑶诊断和鉴别诊断其他含脂质肿瘤，如黄色瘤、肾上腺皮质肿瘤、恶性纤维组织细胞瘤。

⑷显示脂质储积病（如Gaucher病、NiemanPick病、H-S-C病）中组织细胞沉积大量脂质。

⑸证实脂肪引起的血管内栓子（脂肪栓塞）。

⑹证实某些脏器（如心、肝、肾）中的脂肪变性。

知识点8：淀粉样物染色的应用

⑴证实某些慢性炎症，如慢性骨髓炎和结核病变中的淀粉样物沉积。

⑵证实某些肿瘤中存在淀粉样物而做出诊断和鉴别诊断，如骨髓瘤、重链病、Waldensrom巨球蛋白血症、甲状腺髓样癌、肺小细胞癌和胰岛细胞瘤等。

⑶证实某些遗传性疾病（如家族性地中海热、家族性淀粉样物沉积性神经疾病）、变态反应性疾病（如类风湿关节炎、皮肌炎、硬皮病与节段性肠炎）、血液透析及老年人心脏和脑中淀粉样物的沉积。

⑷局限性淀粉样物沉积症（淀粉样瘤）的诊断及鉴别诊断，喉、舌、肺、皮肤、眼和膀胱等处淀粉样瘤可以用淀粉样物染色显示，用以与其他肿瘤和瘤样病变（如声带息肉、颗粒细胞瘤、钙化上皮瘤与炎性假瘤等）鉴别。

知识点9：亲银河嗜银细胞染色的应用

亲银和嗜银细胞染色主要用于证实神经内分泌细胞及相关肿瘤。

胃肠道神经内分泌肿瘤（类癌）大多嗜银染色阳性，而少数亲银染色阳性（主要是起源于中肠的类癌，少数起源于后肠），其他部位神经内分泌肿瘤，如甲状腺髓样癌、垂体腺瘤、胰岛细胞瘤、皮肤Merkel细胞癌与小细胞癌大多嗜银染色阳性。另外，这些银染色法也可以用于证实网状纤维和黑色素。

知识点10：色素染色的应用

病理学诊断工作中使用比较多的染色方法是含铁血黄素和黑色素染色法。色素染色主要用于：

⑴鉴别色素为含铁血黄素、黑色素或其他色素（如脂褐素、蜡样色素、甲醛色素、炭末等）。

⑵普鲁士蓝法可以证实血色病时组织细胞内沉积大量含铁血黄素，显示慢性肺淤血时肺泡内的心力衰竭细胞，以及肝、脾、淋巴结中组织细胞内沉积的含铁血黄素，还可以显示组织内出血，特别是陈旧性出血与梗死灶的出血带。

⑶黑色素染色可以证实恶性黑色素瘤与其他含黑色素的疾病（如Bednar瘤、透明细胞肉瘤、婴儿黑色素性神经瘤、皮病性淋巴结病、黑变病、黑棘皮病、基底细胞癌与脂溢性角化症等）。

⑷结合其他染色方法，鉴别黑变病与假性黑变病（结肠黑变病）和血色病，黑变病的黑色素染色阳性，假性黑变病与血色病的黑色素染色均为阴性，前者普鲁士蓝染色呈弱阳性，PAS染色阳性，后者普鲁士蓝染色呈强阳性，PAS染色阴性。

知识点11：酶组织化学的作用

⑴诊断先天性巨结肠（Hirschsprung病）的乙酰胆碱酯酶。

⑵证实各种肌病的骨骼肌相关酶。

⑶证实骨巨细胞瘤和其他破骨细胞型巨细胞中的酸性磷酸酶（Duray酸性磷酸酶法），此法也可以在石蜡切片上进行。

⑷证实髓系细胞与肥大细胞的氯乙酸酯酶（Leder法），该酶可以在甲醛溶液固定石蜡切片上证实，阳性反应呈红色。

⑸证实黑色素细胞及其肿瘤的酪氨酸酶（DOPA反应）。

⑹前列腺癌和转移性前列腺癌可以用前列腺酸性磷酸酶（PAP）证实。