Dump还是不Dump？这是个问题

原标题：Dump还是不Dump？这是个问题

所谓Dump设门，是指从利用多个系列特异性标记，或结合死活染料，在一个通道中，排除这些标记阳性的信号，从而排除掉不希望看到的细胞。

举个例子，下图是为了精确圈出浆样树突状细胞，为此，首先圈出BDCA-2阳性的细胞，然后再用dump channel（包含了CD3 PE、CD16 PE、CD19 PE、CD56 PE、CD14 PE、CD11c PE一共六个系列特异性抗体，你也可以叫LIN抗体，分别排除T/NKT、NK/粒、B、NK、单核、粒/单核等），圈出所有前述抗体阴性但是HLA-DR阳性的细胞，就是浆样树突状细胞了：

在过去，这种方法有助于克服可用荧光通道数量的限制，将一个荧光通道利用到了极致。 但随着现在荧光通道的增多，多色流式的普及，这种策略在一定程度上已经过时，更重要的是，Dump设门也存在一些致命缺陷。来看一下下面几个例子，理解Dump设门致命缺陷所在。

人CD20

在人类样本中，CD20是很有代表性的B系特异性抗体。但是，最近的研究发现了一个特殊亚群，约占CD3＋T细胞的3～5％，该亚群共表达CD20、CD8、CD45RO，而CCR7－（参见《Features of Human CD3+CD20+ T Cells.》[1]，这类CD3＋CD20＋的T细胞在淋巴器官和脑脊液中也存在，可被CD20靶向抗体清除。如将CD20纳入Dump设门，则会使这类T细胞被排除掉。

人CD56

CD56是NK和NKT细胞的标记，但实际上，CD56还可表达在髓样DC、浆样DC、部分外周血单核细胞、γδT等细胞上。在某些血液肿瘤和癌症上，也可表达，例如慢性粒细胞白血病CD34＋CD38－干细胞通常可表达CD56。

小鼠B220

小鼠B220是CD45的一种异构形式，通常被认为是泛B细胞标记，所以常用于排除或定义B细胞。但是，B220还可表达于骨髓、脾脏中CD19－CD11c＋的浆样DC，甚至在一些即将凋亡的活化T细胞上也可表达。

小鼠CD11b

CD11b的典型的髓系细胞标记，但也可表达在淋巴细胞（如B-1、B-2、NK、NKT等）上。

小鼠NK1.1

NK1.1是NK细胞标记，但并非所有NK均表达NK1.1，例如子宫NK细胞表型通常为NK1.1－CD49b－CD3－CD122＋。

上面说明了Dump的什么问题？

上述数据说明了常用的系列特异性标记，并没有那么特异，这样的话，可能导致两种主要错误：

•探索新的细胞亚群时，可能会因为被误排除，导致无法发现新亚群。•可能由于某些标记的不均一表达，导致在排除的时候排除不干净，例如CD14排除单核细胞，由于存在一些CD14 dim的单核细胞，设门时可能排除不掉。 此外，用Dump设门时，由于这个通道加入了多个抗体，所以如果漏加了其中一个，也不容易发现。 Dump设门的阈值，也会存在较大的主观性。

能不能继续用Dump设门？

•若能充分了解目标细胞群体在健康和病理状态下的表型，而非探索性寻找新亚型，并且已明确了解前述问题所在，可以采用合适的标记组合进行Dump设门。这样可以避免颜色搭配过多造成的荧光补偿调节困难，减少背景信号。•如果仪器有充足的通道可用，希望能够发现新亚群或将细胞群体分得更细，无法找到足够理想的Dump标记，那么建议放弃Dump设门，而是将Dump标记组合拆分到各个荧光通道，提高解析能力。

编译自《Flow Cytometry: To Dump or Not To Dump》[2]

References

[1] 《Features of Human CD3+CD20+ T Cells.》: http://www.jimmunol.org/content/197/4/1111.long

[2] 《Flow Cytometry: To Dump or Not To Dump》: http://www.jimmunol.org/content/201/7/1813.long

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