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一、圆二色谱的强度和紫外吸收有关系吗,荧光光谱测定和圆二色谱测定,溶液配制的浓度有什么要求? 用紫外可见分光光度计测定吸收光谱时,所配的配合物溶液的浓度并不需要配的十分准确。 因为这里的生色剂的量一定是过量的。既然是过量,过多一点,过少一点不影响测定的准确性。只要误差在允许范围之内就不要紧。 但是,是不是生色剂的量就完全不重要了呢?也不是。对于定量分析而言,被测物质的浓度是关键。虽然生色剂的浓度本身不要求很准确,但是加入的量一定要准确而且要一致。就是说,加入空白样、标准溶液和实际样品的体积和浓度要求完全一致。否则就会出现误差。 二、怎么确定测圆二色谱的蛋白紫外吸光波长应该为多少? 先扫个紫外全谱,根据最大吸收峰位置来确定CD的波长,然后再扫CD的全谱,根据最大吸收峰位置进行微调。 三、圆二色谱样品要求? 【只测试液体CD,制样要求】 1,测试时需要空白溶剂做对照扣背景,麻烦样品及溶剂至少各备5ml; 2,样品及溶剂的浓度对测试影响较大,不宜过高或过低(浓度过高,会超电压,数据不准;浓度过低,没有信号):不同物质,最佳浓度不同,测试时不对浓度进行摸索 a,如之前测过CD或有相关文献,建议按对应浓度准备; b,如没测过CD或无文献,但扫过紫外全谱,建议优选紫外浓度的一半配制样品,如不合适再调整(直接用紫外对应浓度,测CD的话浓度偏高); c,如以上均无,建议按0.5mg/ml来配(蛋白质样品,浓度一般0.1-0.5mg/ml),但无法保证该浓度合适。
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