一种人工基底膜及包含其的细胞培养装置

申请/专利权人：法国介观生物技术有限公司

申请日：2021-05-19

公开（公告）日：2023-03-21

公开（公告）号：CN113293097B

主分类号：C12M3/00

分类号：C12M3/00;C12M3/06

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.03.21#授权;2021.09.10#实质审查的生效;2021.08.24#公开

摘要：本发明提供一种人工基底膜及包含其的细胞培养装置，人工基底膜包括：核心层，核心层包括纳米丝网支架及生物膜件；生物膜件填充所述纳米丝网支架的缝隙，生物膜件由细胞外基质蛋白为材质制备而成。与现有技术相比，人工基底膜是一种生物基底膜的仿真结构，具有与生物细胞基底膜相对应的厚度及分子渗透特性。这种人工基底膜呈现出完整的生物活性,同时保证基底膜两边细胞间的相互作用，由此优化区室化细胞培养或细胞共培养，为体外生理学和病理学研究及新药筛选提供先进的3D组织模型。包含该人工基底膜细胞培养装置适用于上皮细胞层、内皮细胞层及相应细胞组织的培养和共培养，特别是屏障结构的构建，如血脑屏障，血气屏障，肾小球基底膜。

主权项：1.一种细胞培养装置，其特征在于，包括：支撑层，所述支撑层包括支撑层本体及开设在所述支撑层本体上的若干通孔，所述通孔包括相对设置且连通的第一开口及第二开口，在所述通孔的边沿处，设有连接所述支撑层及纳米丝网支架的结合层；人工基底膜，厚度小于1μm，所述人工基底膜具有核心层，所述核心层包括所述纳米丝网支架及生物膜件，所述纳米丝网支架采用含10wt％明胶的乙酸、乙酸乙酯和水的静电纺丝液制备而成，并至少覆盖第一开口；所述生物膜件填充所述纳米丝网支架的缝隙，所述生物膜件由生物基底膜胞外基质蛋白制备而成，所述生物膜件包括IV型胶原蛋白自组装膜层以及在自组装膜层的两侧表面修饰的层粘连蛋白层；所述细胞培养装置的制备方法包括：步骤S1：通过软光刻生产由生物相容性聚合物制成的支撑层；步骤S2：通过溅射将结合剂沉积在所述第一开口边沿，形成结合层；步骤S3：通过静电纺丝制备纳米丝网支架将所述第一开口覆盖，将所述纳米丝网支架的纤维两端与所述结合层连接，所述静电纺丝的时间为5min；步骤S4：通过液体薄膜成形工艺在纳米丝网支架的缝隙中沉积包括细胞外基质蛋白IV型胶原蛋白的溶液，IV型胶原蛋白溶液的浓度为0.1wt％，将所述细胞外基质蛋白交联以形成人工基底膜核心层；步骤S5：在所述核心层第一面上修饰层粘连蛋白，使其形成第一层粘连蛋白层；在所述核心层第二面上修饰层粘连蛋白，使其形成第二层粘连蛋白层。

全文数据：

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