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1.3 复苏后细胞密度为0 .31*10e6 cells/mL，活率为92.4%；

1.4 N-2~N-1由WAVE反应器进行扩种，所用反应袋规格分别为2 0 L、5 0 L。扩增阶段实验结果如下：

N-5~N-3阶段的稀释比为14，活率由97.2%提高到99.5% ，细胞生长较为稳定，比生长速率为0.86~0.88 day-1。

N-2~N-1阶段采用ReadyToProcess WAVE 25反应器后，活率稳定在9 9% 以上，比生长速率分别为0.88 day-1、0.87 day-1，与摇瓶相比稳定性良好，未发生由于反应器、容器的更换而导致比生长速率发生变化。ReadyToProcess WAVE 25 参数设定如下：

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XDR-200一次性生物反应器生产

2.1生产前分别对pH （4.01和7.00）、DO（0和100%）、温度电极进行两点校正；

2.2将生产培养基ActiPro 打入XDR 200 L反应袋内预热到37℃ 后进行接种，接种后活细胞密度为0.45*10e6 cells/mL；

2.3 每天检测葡萄糖及乳酸浓度，当葡萄糖与乳酸浓度之和小于4 g/L 时，流加葡萄糖溶液到培养液中葡萄糖浓度为4 g/L；

2.4 分别在第3 天、第5天、第7天、第9天流加3%的补料培养基cell boost 7a和0.3%的cell boost 7b，向培养液中补充氨基酸。

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实验结果

细胞密度变化如图1 。在200L的实验中，在第五天细胞密度为17*10e6 cells/mL时，调节温度到3 1.0℃，比生长速率变低，在第 7天达到最高值24.87*10e6 cells/mL，此后稳定在2 2*10e6 cells/mL~24*10e6 cells/mL之间。

图1 细胞密度变化

图2 细胞活率变化

葡萄糖及乳酸浓度变化如图3 、4，葡萄糖在细胞指数生长期被快速利用，从而产生大量的乳酸，在第4天达到峰值2.03 g/L 。此后由于补糖策略的优化，乳酸浓度逐渐下降，但在收获当天仍含有0.38 g/L，培养工艺需进一步优化。细胞活率由于乳酸的影响，在第4天以后逐渐降低，截至收获当天活率为95.4 %。

图3 葡萄糖浓度变化

图4 乳酸浓度变化

第12 天降温到20℃后进行细胞液收获时，细胞密度为2 3.59*10e6 cells/mL，IgG产量达4 .3 g/L ，与15 L实验结果较为一致。XDR 生物反应器设置参数如下：

生物反应器在中国大规模应用上仍处于起步阶段，随着现代生物技术发展，利用生物反应器进行生物制品生产是行业发展的必然趋势。利用生物反应器悬浮培养细胞生产抗原、抗体等是生物制品的核心技术，结合筛选驯化的高表达细胞株和精细化的放大工艺控制，从而能够有效提高生产效率、产品质量和降低成本，提高产品竞争力。

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主讲人：顾菁博士，Cytiva（原GE医疗生命科学事业部）资深上游技术专家

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参考文献

1)Stoker, Emily B., "Comparative Studies on Scale-Up Methods of Single-Use Bioreactors" (2011). All Graduate Theses and Dissertations. 889.

2)An Zhanga, Valerie Liu Tsanga, Rashmi Korke-Kshirsagarb, Thomas Ryll b.Effects of pH probe lag on bioreactor mixing time estimation.Process Biochemistry 49 (2014) 913–916

3)Sánchez Oscar, Guío Felipe, García Diana, Silva Edelberto, Caicedo Luis, Oxygen transfer, mixing time and gas holdup characterization in a hybrid bioreactor, Proceedings of European Congress of Chemical Engineering (ECCE- 6) Copenhagen (2007) 16 - 20.

4)Dimiter Hadjiev, Nour Eddine Sabiri, Adel Zanati, Mixing time in bioreactors under aerated conditions. Biochemical Engineering Journal 27 (2006) 323–330

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