蛋白

在前面的文章中我们和大家一起学习了蛋白-DNA互作研究技术，目前共有三种应用广泛的蛋白-DNA互作研究技术，我们称之为蛋白-DNA互作三驾马车，它们分别是：ChIP、EMSA和双荧光素酶实验。ChIP和EMSA已经给大家简单介绍过了，今天我们来聊聊该系列最后一种-双荧光素酶报告基因实验（luciferase Assay）。说双荧光素酶报告基因实验前先来看看荧光素酶报告基因。

啥是荧光素酶报告基因？

荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase) 活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

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双荧光素酶报告基因实验的发展

那为啥是双荧光素酶呢？原来，结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因实验技术在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时, 通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal, GUS)不够便利,因为各自的测试化学,处理要求检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶实验和海洋腔肠荧光素酶实验。双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL 载体系统,表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶,在单管中进行双荧光素酶报告基因实验,快速,灵敏,简便。系统还提供 PLB裂解液,用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞,不需操作单个样品。对于正在使用萤火虫荧光素酶报告基因载体的研究人员。双荧光素酶报告基因测试系统将使他们体会到该系统的便利。

体外分泌的荧光素基因:目前NEB公司提供新型的可在细胞外分泌的荧光素酶,分别是Gluc和Cluc,具体使用帮助可在NEB官方网站找到。

双荧光素酶报告基因实验的应用

双荧光素酶报告基因实验目前由两个主要的应用方向，一是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用，转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。第二是研究微小RNA(microRNA)对于靶基因的调控，通过生物信息学方法预测microRNA潜在的靶基因以及干预位点序列，并设计合适的microRNA质粒或干预片段，同时构建靶基因的报告基因质粒，二者同时转染细胞，这是确定microRNA是否能影响（上调或下调）靶基因的首选研究方法。

双荧光素酶报告基因实验的原理

其原理简述如下:

双荧光素酶报告基因实验流程

最后，我们以某公司的双荧光素酶报告基因实验技术服务详细流程来结束今天的学习，欢迎大家以后和我们一起学习其他生物学技术。

动物：

植物：