羟脯氨酸（HYP）含量检测试剂盒 氨基酸代谢BC0250

羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒 氨基酸代谢

产品规格：50管/48样          产品商标：solarbio保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：420库存状态：现货                          关键字: ：羟脯氨酸检测试剂盒|HYP检测试剂盒|羟脯氨酸|试剂盒简要介绍：HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。    样品经水解产生游离的HYP，进一补被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基ben甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。产品详细描述产品内容：提取液：6mol/L盐酸，自备。浓盐酸：H2O（V/V）= 1:1，室温保存。试剂一：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。试剂二：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。    标准品：液体1mL×1支，0.5mg/mL 羟脯氨酸标准品，4℃保存。产品说明：HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。样品经酸水解产生游离的HYP，进一步被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基ben甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。试验中所需的仪器和试剂：天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、6mol/L盐酸和蒸馏水。操作步骤： 一、羟脯氨酸提取1. 组织：称取约0.5g样品于玻璃管，将组织尽量剪碎以便消化，盖子稍松不密闭。加入5mL的提取液，煮沸或110℃烘箱26小时消化没有可见大的团块，16000rpm，25℃，离心20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），用10mol/LNaOH（约3mL）调节pH值6～8范围内。蒸馏水定容8mL，取上清待测。（过程中可能有黑色物质生成，若长时间不能消化，可能为碳化的物质）2. 细胞：取500万个细胞，加入1mL的提取液，煮沸或110℃烘箱26小时消化透明状，16000rpm，25℃，离心20min，用10mol/LNaOH（约0.5mL）调节pH值6～8范围内。蒸馏水定容2mL，取上清待测。二、测定操作：

三、羟脯氨酸含量计算公式

以标准溶液的浓度为x轴，∆A标准（∆A =A标准管-A对照管）为y轴，绘制标准曲线，得到方程y=kx+b。将∆A测定（∆A =A测定管-A对照管）带入方程得到x。

（1）按样本鲜重计算：组织羟脯氨酸含量（µg/g 鲜重）= x×V样品÷（W×V样品÷V组提）=8x÷W。（2）按样本蛋白浓度计算：组织羟脯氨酸含量（µg/mg prot）= x×V样品÷（Cpr×V样品）=x÷Cpr。（3）按细菌或细胞密度计算：细胞羟脯氨酸含量（µg/104 cell）= x×V样品÷（细胞数量×V样品÷V胞提）=2x÷细胞数量。V样品：加入的样品体积，0.2mL；V组提：组织提取液体积，8mL；V胞提：细胞提取液体积，2mL；W：样本鲜重；细胞数量：以104计；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。注意事项：

     3、按样本蛋白浓度计算时，需单独提取样本中的蛋白质并测定。 相关文献：

《Enhancement of the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and cartilage repair by ghrelin》 作者:Litong Fan  Jiaqing Chen  Yanmeng Tao  Boon Chin Heng  Jiakuo Yu  Zheng Yang  Zigang Ge 期刊:Wiley Online Library 影响因子: PMID:30644571

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