抗体稀释度指南

使用何种稀释度 

抗体和抗原之间的结合率、亲和常数可受温度、pH 和缓冲液成分的影响。改变溶液中抗体和抗原的相对浓度也可控制抗体-抗原复合物的形成程度。由于我们通常无法改变抗原的浓度，因此必须针对每种应用和每组实验条件，通过稀释来确定每种抗体的最佳工作浓度。

我们的很多抗体都在数据表中列出了不同应用的推荐稀释度。但是，这些稀释度可能需要进一步优化。

优化抗体稀释度：滴定实验

可实现最佳染色效果和最低背景信号的最优抗体浓度必须在每次分析中通过实验方法单独确定，常用的方法是涉及一系列稀释度的滴定实验。例如，如果产品数据表推荐的稀释度为 1:200，我们建议您采用 1:50、1:100、1:200、1:400 和 1:500 的系列稀释度来确定最佳浓度。

进行滴定实验时，首先应选择固定的孵育时间，然后再制备一系列实验稀释度的抗体。每个稀释度都应采用相同类型的样品进行测试，以保持相同的实验条件。

许多抗体都具有良好的批次间一致性，因此大部分情况下只需进行一次滴定实验。然而，特别是对于多克隆抗体而言，如果同种抗体不同批次的染色结果发生了变化，我们建议您再次进行滴定实验。

数据表上无推荐稀释度的抗体的建议稀释度

未纯化抗体制备物在抗体浓度方面差异很大。如果给定未纯化抗体制备物中特定抗体的浓度未知，我们建议您使用浓缩/纯化试剂盒，并参考下表作为指导。

下表提供了不同来源的抗体在每种应用中可采用的不同稀释度：

组织培养物上清液

腹水

全抗血清

纯化的抗体

WB/斑点印迹

1/100

1/1000

1/500

1 µg/mL

IHC/ICC

未经稀释–1/10

1/100

1/50–1/100

5 µg/mL

EIA/ELISA

1/1000

1/10000

1/500

0.1 µg/mL

FACS/流式细胞术

1/100

1/1000

1/500

1 µg/mL

IP

-

1/100

1/50–1/100

1–10 µg/mL

大致估算 IgG 浓度

1-3 mg/mL

5-10 mg/mL

1-10 mg/mL

-

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