实

时荧光定量

PCR (Quantitative Real-time PCR)

数据处理

相对定量

ACT

和

2-AACT

方法

一、实时荧光原理及其中的概念

实时荧光定量

PCR 

(

Quantitative Real-time PCR

)

作为分子生物学实验中强

大快速的一种检测手段，已经被广泛应用于临床和普通实验室。废话不多说，简

单介绍一下其原理，和两个基本概念

Ct

(

Cycle threshold

)

和

扩增效率

，然后详

细解释一下相对基因定量的方法。

衣，

实时定量

PCR

技术

：利用荧光信号的变化实时检测

PCR

扩增反应中每一个循

环扩增产物量的变化，通过

Ct

值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。

qPCR

中常用的荧光染料为

SYBR Green I

，加入过量

SYBR

荧光染料，

SYBR

荧光

染

料特异性地掺入

DNA

双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的

SYBR

染料分子不

会发射任何荧光信号，因此在

PCR

每个循环的延伸

(

双链图

2

)

过程中检测荧光信

号，可以绘制原始的扩增曲线。如下图

1

：

n 

R

n

荧光信号量，

n

为循环数

扩增曲线可以分为：图

3 

1

.

基线期：

-

荧光信号在最初的数个循环里变化不大，接近一条直线，称为基