然而，储存库效应无法完全解释氢氧化铝佐剂的作用机制。Holt等于1950年发现，在Glenny的实验中，若7d后将豚鼠注射疫苗的部位切除，不会影响免疫应答的结果。Gupta RK等发现，小鼠注射以铝佐剂吸附、以14C标记的破伤风类毒素后，注射部位的类毒素可迅速自铝盐形成的复合物中被释放。最近也有实验表明：在间质液中，大部分抗原将会快速地从其表面解吸附，例如HIV-gp120、破伤风类毒素、卵清蛋白等，而且在与间质液类似的绵羊淋巴液中也可观察到类似现象。研究者推测，这可能是由于间质液（包括磷酸盐、柠檬酸盐和纤维蛋白原等）的解吸附作用所致。

从以上结果来看，吸附形成储存库作用似乎并非是铝佐剂必须的，只要注射局部的抗原浓度足够高，能够被APC有效摄取即可。然而，储存库可确保注射局部抗原高度浓聚以提高APC的摄取量,从而进一步增强免疫应答。

2.2 促吞噬效应

APC对抗原的摄取和处理是诱导免疫反应的一个关键步骤。无论是吸附在佐剂上还是释放到组织间液中的抗原均可以被APC吞噬。铝佐剂与可溶性抗原结合成颗粒形式，从而有利于APC吞噬。Seema等认为铝佐剂的免疫增强作用不在于其吸附的量，而主要在于有助于APC的吞噬，如促进树突状细胞和巨噬细胞对抗原的吞噬和加工。Rimaniol等研究了铝佐剂与体外巨噬细胞的作用机制，发现载铝巨噬细胞呈现出表现型和功能的改变，具有骨髓炎样树突状细胞的典型特征，并表现出诱导MHC II类抗原特异性记忆反应的能力.以上结果表明巨噬细胞对铝佐剂疫苗有反应性，后者有助于成熟的巨噬细胞构建记忆性免疫应答，从而产生长期的免疫保护。Mannhalter等比较了巨噬细胞对含铝和不含铝的破伤风类毒素的摄取结果，以放射性125I标记破伤风类毒素，与巨噬细胞体外共同孵育，发现铝佐剂可显著提高巨噬细胞对破伤风类毒素的摄取速度，孵育10min~6h后，巨噬细胞对含铝破伤风类毒素的摄取速度约为无铝组的5~10倍。接种3h后，机体对含铝佐剂抗原的摄取速度相当于无铝对照组的10倍左右。

2.3 铝佐剂与NLRP3途径

铝佐剂可通过不依赖toll样受体（TLR）的机制促进局部炎性环境产生，募集血细胞，促进DC分化。然而，铝佐剂促炎活性的靶分子仍未确定。最近从不同实验室获得的资料显示，该靶分子可能为NOD样受体蛋白3（NLRP3）。Li 等研究表明巨噬细胞主要对抗原进行吞噬和破坏作用，铝佐剂则可激活细胞内源性免疫应答相关的NLRP3炎性复合体，促进巨噬细胞分泌产生高水平的促炎症因子IL-1β和IL-18。

NLRP3属于NOD样受体（NLR）家族成员，可与CARD结构域受体蛋白ASC及天冬氨酸蛋白水解酶1相互作用形成一种蛋白复合体，该复合体称为炎性小体。当炎性小体被活化后，可加工促炎细胞因子（包括IL-1β、IL-18、IL-33等）的前体，使其成为成熟形态。在体外试验中发现，铝佐剂通过NLRP3活化天冬氨酸蛋白水解酶1，并可与TLR激动剂协同作用。细胞内吞铝盐微粒后，可生成活性氧，同时发生溶酶体损伤，以上两种信号均为的上游活化信号。另外，铝盐介导的细胞毒性可进一步介导细胞死亡，释放尿酸，后者可间接活化NLRP3炎性小体。但是近期也有研究表明，使用铝佐剂免疫NLRP3缺陷型小鼠，NLRP3的缺陷对于T、B细胞应答并没有显著地影响，因此NLRP3途径在佐剂刺激免疫中的作用仍需进一步的研究。Eisenbarth等进一步研究表明氢氧化铝佐剂可以激活Th2细胞分泌IL-4，并诱导MHC-II类分子和CD83，CD86等的表达，最终可诱导型体液免疫应答。

2.4 其他方面的研究

2.4.1 铝佐剂与固有免疫反应

研究者们试图通过体外实验寻找铝佐剂能够刺激机体产生免疫活性的主要靶细胞。与TLR配体不同，铝佐剂在体外不会直接活化DC细胞，而是作用于巨噬细胞，包括介导其分化为DC样细胞，使其抗原递呈功能增强。另外，腹腔内注射后，铝佐剂的佐剂活性与注射位点的血液细胞（包括炎性单核细胞）的募集有关，同时还发现铝佐剂可促进炎性单核细胞向DC细胞分化，这与体外实验的结果一致。有趣的是，铝佐剂募集的腹腔单核细胞不仅表达MHC II类分子，其摄取抗原的能力也增强了。另外，由单核细胞分化而来的、携带抗原的DC可有效的迁移至引流淋巴结，且可诱导较强的T细胞增殖。

Wang XY等在抗原-抗体复合物型治疗性乙型肝炎疫苗的IIIa期临床试验中发现，仅注射铝佐剂的对照组亦出现明显的治疗效果。使用乙肝转基因小鼠研究发现，注射铝佐剂或乙肝疫苗的小鼠血浆中TNF-α水平均升高，但铝佐剂组同时还伴有IL-10水平升高，表明铝佐剂可诱导炎性反应产生，从而产生治疗性作用。

2.4.2 铝佐剂与获得性免疫反应

通常认为经由TLR对免疫系统的刺激是T细胞依赖性免疫反应起始的前提，因为该刺激可以导致DC完全成熟和共刺激信号向T辅助细胞的传递。使用MyD88敲除小鼠进行的试验表明，经由TLR对B细胞的刺激是T细胞依赖的抗体反应所必须的。研究者发现，在体外试验中，铝佐剂无法直接活化DC使之表达并释放前炎性细胞因子，表明它不是通过TLR依赖的信号起作用。使用MyD88与甲状腺激素受体相互作用蛋白（TRIP）同时敲除的小鼠进行的试验表明，将铝佐剂与T细胞依赖的抗原共同免疫，可绕过TLR信号途径，诱导强烈的抗体反应。以上发现证明，获得性免疫反应即使在没有TLR信号通路的情况下仍可被诱导产生，铝佐剂的作用可不依赖TLR。

3．影响铝佐剂效应的主要因素

3.1吸附率

在疫病流行之前接种疫苗，使机体产生针对疫病诱发抗原的抗体，是预防疫病的最好方法，而在疫苗中抗原的吸附率是决定免疫效果的重要因素之一。铝佐剂与抗原通过多种物理或化学作用力吸附在一起，包括静电力、疏水作用以及配基交换等在这些作用力中以静电吸引力最普遍，而铝佐剂表面的羟基与抗原表面的磷酸基团发生配基交换所产生的作用力最强

通常情况下，抗原的吸附率越高，免疫效果越好；反之，免疫应答的效果越差。Gupta等已证实铝佐剂吸附苗的免疫效果取决于佐剂对抗原的吸附度和佐剂的剂量。

世界卫生组织要求白喉和破伤风类毒素苗的吸附率至少要达到80%,美国食品药品管理局要求至少达到75%的吸附率。

3.2吸附强度

对于铝佐剂的吸附，用来定义这个概念的有两个重要的参数：1）吸附能力，指在单层吸附的条件下，铝佐剂能够吸附抗原的最大量；2）吸附强度（Strength of the adsorption），通过吸附系数（adsorptive coefficient）进行表征的一个参数，吸附系数可通过兰格缪尔等温吸附方程求得。

近年来的研究表明，抗原在铝佐剂表面的吸附度（adsorption degree）与最终成品疫苗的免疫效果有直接的联系。Chary M-F等研究表明，用吸附度分别为3%，35%和85%的三种溶菌酶疫苗进行免疫后，产生了相等的免疫强化效果。而将这三种疫苗在体外与羊淋巴液进行混合后，疫苗的吸附度均变为40%，由此证明免疫增强与成品疫苗中铝佐剂对抗原的吸附度无关，而与免疫后疫苗在体内的吸附度紧密相关

在吸附度相同的情况下，如果抗原与铝佐剂之间的作用力大小，即吸附强度不同，其免疫效果也存在差异。Bethany Hansen等研究证明，四种体外检测吸附系数均不相同的疫苗，最终在小鼠体内产生的抗体滴度与吸附系数的大小成反比例关系。铝佐剂对抗原的吸附强度受到疫苗中磷酸根含量的影响。田俊楠通过对重组戊型肝炎氢氧化铝佐剂疫苗中的磷含量与最终免疫效力的关系进行研究证明，随着疫苗中磷酸根含量的增加，氢氧化铝佐剂对重组戊型肝炎抗原的最大吸附量(Γm)呈逐渐降低的趋势，抗原在羊淋巴液中的吸附率也同样逐渐降低，而免疫血清中抗体滴度逐渐增高，表明在一定范围内增加铝吸附产物内磷酸根离子的浓度可以降低氢氧化铝佐剂对抗原的吸附强度，从而提高疫苗的免疫抗体滴度。

3.3氢氧化铝佐剂颗粒大小及均一度

近年来，通过多方面研究发现疫苗配伍中所使用的氢氧化铝佐剂颗粒的大小以及其颗粒均一性均会对疫苗的免疫效果产生一定的影响，特别是注射疫苗后的副反应发生于铝佐剂的这两点特性有着较为紧密的相关。槐丽萍等，将白喉类毒素分别吸附至平均粒径为200nm和600nm的Al(OH)3佐剂后，免疫体重在10-14克的NIH小鼠，5周后测定抗体效价，研究结果表明，白喉类毒素经200nm的Al(OH)3佐剂吸附后制备的疫苗在物理性状、吸附效果以及免疫抗体效价方面均优于用600nm Al(OH)3佐剂制备的疫苗。叶琳等通过研究发现，分别使用AlCl3+NaOH和AlCl3+NH3.H2O配制获得的氢氧化铝佐剂在浊度、粒径、颗粒均一度以及沉降度等多方面均存在明显差异，并且经与HBsAg吸附后免疫小鼠结果证明，通过AlCl3+NaOH配制获得的氢氧化铝佐剂吸附抗原后，复合物粒径大于AlCl3+NH3.H2O制备的氢氧化铝佐剂吸附后的复合物，佐剂对抗原的吸附率以及免疫小鼠后的体内效力前者均明显优于后者（p