问9：如何判断是否转化成功？

答：平板出现乳白色单菌落，直径可达1 mm以上，判断为转化成功；如果平板出现一层菌落，或者菌落都太小，不能挑取单菌落，判断为转化失败。常见的失败多为筛选平板上没能长出任何菌落。

问10：酵母转化质粒加入多少合适？

答：对于高纯度质粒，单转建议质粒加入量100 ng以上，共转建议质粒加入量每种300 ng以上，文库转化建议文库质粒加入量为5-25 μg。质粒的加入量和转化子的数量呈正相关，为了得到较高的转化效率，对于通过NanoDrop定量的质粒，单转和共转均建议每种质粒加入1 μg以上。如出现转化失败的问题，请优先检测质粒的质量，电泳是最为简单有效的方法。

问11：转化失败的原因有哪些？

答：最常见的转化失败为空板，没有菌落长出来。大概率问题出在质粒上，首先需要对质粒进行电泳检测，电泳结果需为大小正确且明亮的条带；其次核对筛选培养基的选用和配制是否正确；排除上述因素，就需要复查酵母菌的外观气味是否正常，或者进行镜检。

问12：文库转化怎么计算转化效率？

答：文库转化需要尽可能保证文库的完整性，得到尽可能多的转化子。一般认为在缺陷平板（不含报告基因检测缺陷及抗生素平板）上得到十万个以上转化子为合格。比如10 μL的重悬产物，取1 μL稀释到100 μL涂板后得到10个以上克隆，转化实验即为成功的。

问13：酵母化学转化的转化效率一般是多少？

答：Coolaber的酵母转化试剂盒，一般转化效率（环状质粒）可以达到 10 3-5 /μg质粒。可以通过提高酵母菌的活性，或者YPD Plus复苏培养进一步提高转化效率。

问14：酵母转化的质粒是否需要线性化？

答：酵母表达实验，大多数质粒都需要线性化；酵母杂交实验，常见的线性化质粒有单杂实验中的pHisi（不是pHis2）和pAbAi，其余的质粒多是不需要线性化的。

问15：线性化质粒转化失败怎么解决？

答：由于要重组基因组，需要线性化质粒，但其转化效率远远低于环状质粒，一般每μg质粒只能得到50个以内的转化子。由于酶切体系以及纯化方法的影响，造成质粒回收效率低、质量差，是转化失败的主要因素。建议选用质粒大提试剂盒增加质粒的提取量，扩大酶切体系，改善回收方法来解决。酶切完成后，只取少量电泳检测，对于完全酶切的样品，直接用吸附柱纯化；和酶切产物全部电泳后胶回收相比，质粒的损耗率小一些。

Coolaber酵母转化试剂盒的分类及组成：

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酵母转化试剂盒种类及特点：

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酵母杂交实验常用的酵母感受态细胞：

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二、转化试剂盒组成及功能的问答

问1：经典转化试剂盒和Super转化试剂盒是否需要准备其它试剂？

答：需要准备DMSO，无菌水或者无菌生理盐水，无需其它试剂。

问2：Super转化试剂盒中组分的作用以及注意事项？

答：包含Y1，Y2以及Y3溶液。Y1用于酵母感受态制备，Y2用于感受态保存，Y3用于质粒转化；Y3含有单链担体DNA（Carrier DNA），产品包装为4×25 mL，为了保证产品的稳定性，长期不用请置于-20℃保存。

问3：50% PEG3350溶液是否可以高压灭菌？

答：经过Coolaber检测，PEG3350高压灭菌可以用于酵母转化，但过滤除菌的PEG有更高的转化效率。高压灭菌可能会导致PEG分子量或浓度发生变化，从而影响转化效率。建议选择过滤除菌PEG溶液。

问4：50% PEG溶液过滤除菌太慢是否正常？

答：50% PEG粘稠，针头滤器过滤太慢，可选用大面积的真空抽滤设备除菌。

问5：Carrier DNA是否需要预变性处理以及处理方法？

答：Coolaber的Carrier DNA已经做过变性处理。基于保证转化效率的目的，产品使用前可以再次变性处理。建议分装至PCR管内，于PCR仪（设置98℃ 10 min，4℃ 2 min）处理后冷冻保存。变性Carrier DNA可以反复冻融三次，超过三次需要再次变性处理。

问6：Carrier DNA是否可以由鲑鱼精DNA（高分子量线状，CAT：CS9672）制备以及制备方法？

答：可以。但是制备方法复杂，需要溶解，剪切并测定分子量大小，制备方法参照分子克隆。建议直接选用Coolaber处理好的Carrier DNA（CAT：YT0003）。

问7：YPD Plus Liquid Medium的作用是什么？

答：YPD Plus Liquid Medium用于酵母转化后的复苏培养，经Coolaber检测，在增加复苏培养步骤后，转化子的数量可以增加50%-100%，在文库转化中作用明显。但在互作验证或单个质粒转化实验中，经典转化Kit或Super转化Kit的转化效率完全可以满足实验要求。YPD plus营养丰富，极易污染，产品包装为4×25 mL形式，长期不用请置于-20℃保存。

问8：酵母转化PEG/LiAC混合液的成分和用途？

答：酵母转化PEG/LiAC混合液（CAT：YT0006）由50% PEG、1M LiAC、10×TE按照8:1:1组成。按照每100 μL感受态细胞加入500 μL混合液进行转化反应，具体方法可以参照Coolaber酿酒酵母感受态细胞的使用说明。

问9：1×TE/LiAC混合液（即用型）的成分和用途？

答：1×TE/LiAC混合液（即用型，CAT：YT0009）与通常说的1.1×TE/LiAc浓度一致，成分为110 mM LiAC及1.1×TE。主要用于制备酵母感受态细胞，具体可以参照SK2400或SK2401的使用说明。

问10：菌落转化Kit（SK2390）在什么情况下可以使用？

答：菌落转化Kit可以满足大多数单个或者两个载体转化的实验，在菌落数满足要求的条件下，每μg质粒转化后会得到50个以上的转化子。

酵母转化相关产品的特点及用途：

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