EMSA是研究启动子结合蛋白的经典方法，基本过程是将放射性标记或非放射性标记的包含特异的DNA位点的DNA片段与DNA结合蛋白共同孵育后进行电泳分析。好了，原理就不再过多赘述，现总结实验中一些小的心得体会，与大家分享。                     1.探针是自己设计与标记。我们在实验中摸索探针标记的位置对最终结果的影响情况， 3’端、5’端双标记优于3’端单标记，因为两端双标记能更好的提高灵敏度。2.核蛋白样品的制备。EMSA实验中影响成功的因素有很多，核蛋白样品的制备就是其中很重要的一点，当然大家只要做到在提取的过程中不要破坏蛋白原有的天然活性和构象，并且提取的蛋白浓度高于1mg/ml就好啦。为什么对蛋白浓度有要求呢？因为如果达不到浓度，为了保证核蛋白的质量我们会提高蛋白样品的体积，这样会使体系中盐离子浓度升高，高盐离子会抑制DNA和蛋白的结合。3.胶配制。EMSA实验中不但要求配制非变性凝胶，而且我们要想得到好的实验结果，一般要控制胶在5min凝固，取梳子时一定要小心，不要弄坏了点样孔，胶配制好，进行预电泳之前，最好用电泳缓冲液反复冲洗点样孔。4.预电泳。预电泳要在冰浴恒压条件下进行30-60min。预电泳的作用就是为加样后电泳 “清除路障”，也就是除去凝胶中没有结合的单体和双体和聚合引发剂。预电泳之后，一定要换上新鲜配置的电泳缓冲液电泳，记住，一定冰浴哦。                          5.尼龙膜的选择。EMSA实验用的是尼龙膜，表面带有正电荷，大家一定不要用错，有一次我用了硝酸纤维素膜，转膜后膜上形成了“一朵花”，当时内心那个奔溃啊，转膜时一般300mA 、40-45分钟比较好，低于40分钟转膜不彻底，高于45分钟，转过了（滤纸片上会有溴酚蓝），EMSA就得不到正常结果了。6.紫外交联。正常情况下是用交联仪操作的，但很多单位学校都没有，这时候我们就可以把膜放在无菌操作台的紫外下10cm处交联30分钟就可以了。注意只有这一步你的膜是可以干燥的，其余的每一步都要保证膜的湿润，另外，尼龙膜在实验前10-30分钟浸泡在电泳缓冲液中。                7.Streptavidin-HRP 的加入。这一步非常关键，有很多人最后化学发光图像是 “花的”，有的地方背景很深，有的地方泳道里面探针含量特别少，就是这一步操作没有做好。搬好小板凳，"干货”来了：我们通常会将Streptavidin-HRP按照一定比例稀释于封闭液中，然后摇晃混匀，注意一定要混匀！一定要混匀！一定要混匀（重要的事说三遍）！然后加入装有膜的容器中，摇床孵育。      以上是实验操作过程中需要注意的地方，要想得到一个EMSA阳性结果，有很多因素是可以干扰的，比如实验设计，所以我们更要在操作上严格把控，最后，预祝各位童鞋们能够得到好的实验结果，希望有帮到大家哦！！！