超滤是大分子脱盐、浓缩最方便的方法，重复性好，得率有保障，已经在蛋白、抗体、病毒、核酸、囊泡等样品制备中建立标准操作；在目前大热的外泌体制备中也已经成为主流方法。

Millipore的Amicon® Ultra超滤管采用离心方式快速处理样品，是很多科研小伙伴们每天要用到的基本装备。但是，在默克生命科学团队推出超滤管中文说明书(AU0.5/4/15)之前，我们发现近90%的使用者在选择和使用过程中因为缺乏必要信息而没有获得最佳体验，更重要的是，宝贵的样本会遭受本可避免的损失！

选对截留分子量，事半功倍

如果目的蛋白是120kDa，请问应该选择的超滤管规格是100k，50k，还是30k甚至10k？你采用的是1/2，1/3抑或1/6算法？这些没有统一的说法，是因为不同厂家的膜的截留分子量的定义不同。Millipore的超滤管采用其特有的再生纤维素膜，定义为：一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子，即100kDa的球形蛋白用100k的Ultracel®再生纤维素膜得率超过90%。请仔细查看以下默克生命科学官方数据：

(以0.5mL的AU0.5为例，其它型号截留分子量的选择原则一致，具体离心力和离心时间不同。)

截留分子量选小啦！看到这个表，你是否发现原来抱怨Millipore超滤管流速偏慢的根源来自对于Millipore截留分子量定义的误解。膜孔径要小于目的分子这是第一原则。如果分子有近似球形的立体结构(而非明显的线性分子)，在Millipore再生纤维素超滤膜体系内，选择“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超滤管是最佳选择，这样操作起来又快又好，既保证了样品回收率，又缩短了离心时间，大幅降低大分子损伤风险。

因为样品分子形状不同，为了最大化样品的回收，对于没有参考的样品，可以初步选择截留分子量约为目的分子分子量1/2的超滤管。

倒转离心，最大化回收率

收取体积已经很小的浓缩好的样品时，你会：

A 购买最尖细的枪头，把样品吸回来

B 浓缩倍数低一点，以便用枪头把样品吸回来

C 反转离心回收，获得最高得率

正确答案“C”,你答对了么？

反转离心回收

①.反转离心回收设计使蛋白样品，特别是小体积样品高效回收，避免枪头吸取造成的样品丢失或操作错误

②.0.5mL、2mL 和 70mL 超滤管设计为反转回收模式

现在你总该知道为什么收到AU0.5的时候会有两个外管了吧～

脱盐浓缩，一个超滤管搞定

浓缩用超滤管，脱盐用透析袋或脱盐柱，这是很多实验室一直沿用的实验操作。其实呢，超滤管做“脱盐+浓缩”，也是很多蛋白操作高手的小诀窍。我们Millipore官方中文说明书特别给大家提示了这个方法——用更少的工具和更短的时间，减少转移误操作和样品损失，却能获得更好处理效果，你get了吗？

Q&A:

Q: Amicon® Ultra超滤管的膜材质是什么？

A: Amicon® Ultra超滤管的膜材质为默克密理博特有的 Ultracel® 再生纤维素膜，生产工艺严格，截留分子量明确而精准，蛋白吸附损失最小。

Q: 如果要用超滤的方法分离两种蛋白，那么这两个蛋白的大小需要相差多少？

A: 按照经验，我们推荐两个蛋白的分子量要相差一个数量级（10倍）。

Q: Amicon® Ultra超滤管可以用于病毒浓缩么？

A: 可以。对于慢病毒，我们推荐Amincon®Ultra 100kDa; 对于腺病毒，推荐Amincon® Ultra 50kDa。具体的操作步骤，可以参考我们的病毒浓缩纯化试剂盒FTLV00003和FTAV00003的产品使用说明书。另提供AAV（腺相关病毒）的制备方法供参考。

Q: Amicon® Ultrar超滤管可以用酒精消毒灭菌么？

A: Amicon® Ultra与70%乙醇是兼容的，但是我们对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试，所以无法提供更进一步的参考信息。

Q: Amicon® Ultra超滤装置是否可以用于高压灭菌？

A: Amicon® Ultra都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。

Q: Amicon® Ultra超滤管是否不含RNA酶？

A: 我们不保证超滤管不包含RNA酶，建议您可以用0.1%DEPC在37度浸泡2小时，以完全灭活RNA酶C残留的DEPC可以用Milli-Q®超纯水洗涤除去。

Q: 用Amicon® Ultra超滤管去除去污剂是有什么需要注意的吗？

A: 去污剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度（Critical Micelle Concentration, CMC）时，去污剂分子会聚集形成微团分子而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果，具体的操作步骤请垂询默克密理博技术支持专线400-889-1988-2分机。

Q: 我的蛋白在浓缩时出现了沉淀为什么？

A: 蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。我们建议蛋白浓缩后的最终浓度不超过20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白，我们建议的改进方法是：

1）离心力降为推荐离心力的30%-50%

2）改选择截留分子量更大的过滤装置（如原本选用10k，此时可以选择30k）

3）在浓缩过程中取出超滤管，用枪头反复吹吸几次

Q: 浓缩后我发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因是？

A: 首先，Amicon® Ultra超滤管的最低起始蛋白浓度为25ug/ml.请确保您的样本的起始浓度大于这个浓度。

其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃您的样本滤过液用以分析可能的原因：

1）如果您的样本在滤过液中，那么请排查：

a) 您是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？

b) 使用的离心力是否是在最高范围内？如果您使用的是rpm，请换算成相应的g离心，具体换算方法请参考：

https://www.msu.edu/~venkata1/gforce.htm

c) 离心机最近是否有校准过？

d) 您是否首次尝试这个蛋白？如果能确保你用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是您的目的蛋白的原因。

有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用上一分子量级别的超滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。

2）如果您的样本也不在滤过液中：

a) 您的样本起始蛋白浓度是否大于25ug/ml？

b) 您用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？

c) 您的目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。

Q: 有时候我用超滤离心管连水都离不下来，可能是什么原因？

A: Amicon® Ultra超滤膜中含有微量甘油。如果出现这种情况，先用0.1N NaOH清洗再离心。最后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。