蛋白质一级结构的测定，即确定氨基酸的线性序列，是分子生物学研究的基础之一。自从1950年代首次测定胰岛素的氨基酸序列以来，技术已经取得了很大的进步。下面是测定蛋白质一级结构的基本步骤和一些常用方法：

1.蛋白质纯化：

首先，需要将目标蛋白质从其他蛋白质和杂质中分离出来。

2.切割蛋白质：

蛋白质的长度可能非常长，直接测定其氨基酸序列可能是困难的。因此，通常使用特定的蛋白酶（如胰蛋白酶或胃蛋白酶）来将蛋白质切割成较短的肽段。

3.肽段排序：

通过多次切割和不同的酶，可以得到重叠的肽段，这些重叠片段可以帮助排列整个蛋白质的氨基酸序列。

4.测定肽段的氨基酸序列：

（1）Edman 降解法：这是一种经典的技术，通过逐步去除肽链的N端氨基酸来确定序列。尽管这个过程相对缓慢，但它非常准确，尤其适用于较短的肽段。

（2）质谱法：现代技术更倾向于使用质谱测序来确定蛋白质和肽段的氨基酸序列。通过质谱，可以测定分子的质量，并根据质量确定氨基酸的顺序。

5.蛋白质序列的重建：

一旦所有的肽段都被测序，就可以通过查找这些肽段之间的重叠区域来重建整个蛋白质的氨基酸序列。

6.与数据库比对：

得到的氨基酸序列可以与已知的蛋白质序列数据库进行比对，以确定是否与其他已知蛋白质相似或相同。

图1

随着技术的发展，尤其是质谱技术，蛋白质一级结构的测定变得越来越快速和准确。此外，随着更多的蛋白质被测序并存储在公开数据库中，研究者可以更容易地识别和比较新发现的蛋白质。