MS也会造成孵化率下降，产蛋率下降约2-3%，弱雏死亡率5-10%；在肉鸡中多发于4周龄以上，最早2-3周发病，跛脚、生长迟缓；蛋鸡易发生胸囊囊肿、跗关节和趾部关节内乳酪色或灰白色脓性渗出液，后期形成胶冻样或干酪样物，死淘率高的达到3-5%。

部分毒株的支原体在蛋鸡中引起蛋壳尖端异常症( eggshell apex abnormalities-EAA)。

支原体也会造成免疫抑制（chen et al., 2020）。

03支原体的流行病学特点

支原体传播方式多样，既可以水平传播，也可以垂直传播。感染后几乎终生带菌，成为病原阳性带菌鸡。

支原体流行于世界各地的养鸡场，根据流行病学调查，感染率平均为70～80% 。

各种年龄的鸡均可被感染，但成年鸡较幼龄鸡的抵抗力高；不同品种的鸡抵抗力相似。应激因素可促进该病的爆发和流行。

04我国家禽支原体感染现状

王老师汇总整理了所在实验室从2020年3月到2022年9月的检测数据，发现所测样品中MG抗原核酸阳性率最高的是商品代肉鸡。

如果从日龄来看，6周后的阳性是最多的。早期感染（1-2周）也有，但检出率更低，但早期的感染可以基本判断为来自垂直传播。

MS自2010年最先从黄羽鸡开始爆发。2010年到2013年，我国鸡群MS病例数急剧增加。

2014年后扩散至全国，呈爆发流行趋势。

根据MS vlhA基因序列，MS可分为15种基因型（A-K）。我国鸡群MS分离株绝大部分属于K基因型（其意义有待研究），同时存在A基因型和E基因型。而不同部位的分离株，序列也存在差异。

MG/MS的第一个感染高峰在7-12周左右，第二个高峰在产蛋高峰阶段。

全国鸡群整体支原体感染率高，商品代白羽肉鸡MG感染压力较大，蛋鸡MS感染压力较大。祖代鸡感染率低，但存在两极分化的现象。

感染家禽支原体的鸡群普遍存在混合感染：支原体+IBV，支原体+CAV，支原体+大肠杆菌…

05家禽支原体检测方法分析

家禽支原体检测方法有病原分离、血清学检测和分子生物学方法等。

病原分离：可取气管或气囊的渗出物制成悬液，直接接种，加有醋酸铊和青霉素的支原体肉汤或琼脂培养基。

血清学方法：主要用于鸡群监测和怀疑有感染时的辅助诊断，常用技术包括血清平板凝集试验（SPA）、血凝抑制试验（HI）和酶联免疫吸附试验（ELISA）。

分子生物学方法：PCR、荧光定量PCR、等温扩增技术、核酸分子杂交。

采样时，对于活禽，要采集鼻腔、口咽、食道、气管、眼、泄殖腔棉拭子样品；对于死禽，可采集鼻腔、气管、气囊、眶下窦或关节液等部位样品；而对于鸡胚，可从胚胎的卵黄膜内表面、气囊和口咽获得。

样品的运输也要格外注意。在运输过程中，需加冰袋或者其它制冷措施保持低温状态。

有多种用于分离培养的培养基，但最常用的是Frey’s培养基。分离成功后，可转接6-8 日龄SPF鸡胚的卵黄囊，保存超过24h死亡的鸡胚及尿囊液。

家禽支原体分离过程中要尽量无菌操作，控制细菌污染；培养基需含有在发病早期（急性期）采集样品，正确选择采样部位，规范操作；可对样品进行倍比稀释，因组织中存在抗体、抗生素等因子，可能抑制支原体增殖；支原体分离株的保存：冻干保存效果最好...

支原体种属的鉴定

家禽支原体的血清学检测方法

血清学检测方法是临床诊断支原体感染应用较广泛的方法，操作相对简单，主要应用于群体监测和血清学诊断的初步筛查。

有关禽支原体检测的血清学方法有：平板凝集试验（SPA）、血凝抑制试验（HI）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光试验（IFA）和琼脂免疫扩散试验（AGP）。

在直播过程中，王老师对这些方法的原理、优缺点和注意事项进行了详细的分析和讨论。

血清平板凝集试验结果

王老师特别提醒，血清学诊断只能测出鸡群群体的感染水平，并不能代表个体的感染状态！

家禽支原体的分子生物学检测方法

分子生物学检测方法操作简便，可直接检测样本中的病原核酸不需要进行病原分离，结果准确，但可能存在一定比例的假阳性和假阴性。

常用的分子生物学方法：聚合酶链式反应（PCR）、荧光定量PCR、等温扩增技术等。荧光定量PCR比PCR具有更高的灵敏度和准确性。

在进行PCR操作时，要避免气溶胶污染。需要对实验室进行核酸污染评估。如果存在核酸污染，需要采取一系列的消毒措施，直至实验室核酸污染监控为阴性。

如何避免假阴性？

王老师认为关键在于采样时机、采样方式与部位、检测方法/试剂盒的选择、以及阴、阳性对照的设置。

06家禽支原体检测方法的综合应用实际生产中，单靠一种方法难以了解鸡群真实情况，因此往往需要综合应用多种检测方法得出结果，并对结果进行科学的对比和分析，最终才能形成可靠的决定（如用药或者免疫）。

在应用ELISA监控场区支原体感染状况时，应建立属于自己的基准线。基于长时间对数据积累和处理的经验，能够有效地分析结果。

偏离基准线的值提示鸡群生产环境中的变化。较基准线低的滴度值可能表明疫苗接种方式有误或免疫失败。较基准线高的滴度值可能说明鸡群正面临感染压力。

针对不同疫苗产生的抗体，王老师给出了参考滴度（免疫后6周）：

F株：