一文读懂激光共聚焦显微镜(LSCM)! |
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LSCM应用广泛,在生命科学、医学研究中日益受到重视。一方面可以观察细胞或亚细胞形态结构等研究,如检测蛋白质、抗体及其他大分子;检测细胞凋亡;细胞器的观察和测定(线粒体、溶酶体、内质网和高尔基体);检测细胞融合;观测细胞骨架;检测细胞间隙连接通讯;检测细胞或组织内脂肪;进行细胞或组织结构的三维重构等。同时,LSCM还可以进行活体细胞或组织功能的实时动态检测,如测定细胞内钙变化;测定细胞PH 变化;检测膜电位变化;药物筛选、检测荧光漂白恢复等。除此之外,LSCM在交叉学课中的高分辨率成像,如神经科学、药理研究、材料研究、化工原料等也广泛应用。 五、LSCM经典案例 Live/Dead染色 成骨细胞骨架(红色)与核(蓝色)染色 线粒体与荧光探针的共定位 细胞内ROS 免疫荧光染色 大肠杆菌表面吸附噬菌体(超分辨) 金黄色葡萄球菌细菌膜多糖染色(超分辨) 皮克林乳液 水包油乳液 软骨细胞三维生长 细胞骨架 生物膜 六、测试注意事项 (一)样品邮寄 1、细胞/细菌/污泥类样本 ①细胞:冻存的细胞;25平方厘米培养瓶长到70%加满培养基室温固定好寄送 ②细菌:菌液5000 rpm离心10 min,于1.5 mL离心管中得到绿豆大小沉淀,寄送沉淀。细菌类需要死活染色/ROS染色的,一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触。 ③蛋白/多糖类:样本加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存,样品不和冰袋接触。 ④污泥类:样本如果太厚,可以进行冷冻切片,具体请和工作人员沟通。 2、植物类样本 ① 直接拍摄:样品长宽不超过20mm,高不超过10mm;或直径不超过10mm,厚度不超过5mm,一定标出测试面。一般加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触。 ②制样后拍摄:可进行简单冰切及刀切,软化等。样本准备好后加冰袋泡沫盒4度保存,样品不和冰袋接触。 3、生物膜类样本 ①金属/瓷砖/岩石等块体类:建议长宽高尺寸不超过1 cm,且均要求样品表面平整,需要标出拍摄面(测试面起伏 |
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