目的:建立非小细胞肺癌(NSCLC)第三代EGFR-TKI奥希替尼(Osimertinib)耐药细胞系并初步探讨其耐药机制。方法:以人NSCLC细胞系H1975为研究对象，利用低浓度奥希替尼持续诱导筛选继发耐药细胞系。MTS法检测细胞奥希替尼药物敏感性。活细胞工作站检测细胞增殖能力。流式细胞仪检测细胞周期与细胞凋亡。利用蛋白质谱检测数据构建亲代与耐药细胞的差异表达基因谱并通过qRT-PCR和Wester blot验证耐药相关基因。结果:成功获得奥希替尼继发耐药H1975/OSI细胞。与亲代细胞相比，H1975/OSI细胞的耐药指数增加了27.25倍( P