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细胞转染
| Polysciences 转染试剂系列是基于 Polyethylenimine 的产品，因其较高的转染效果，已广泛应用于 AAV，LV 和重组蛋白等工业化生产。 Polyethylenimine 是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔两个碳原子，即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何 pH 下都能充当有效的「质子海绵」体 (proton sponge)，因此，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成带正电荷的复合物颗粒，该颗粒与细胞表面阴离子结合，很容易通过内吞作用进入细胞；并且可抵御溶酶体的降解作用，从而提高核酸分子的表达水平。 Polysciences 公司提供一系列 PEI 产品：研究级产品 PEI MAX 和 Transporter 5，以及 cGMP 级 MAXgene GMP，提供适合于任何规模 AAV、LV 病毒载体和重组蛋白制造的成本效益高、供应可靠且高质量的转染试剂。 PEI MAX 是一款高度浓缩的粉剂，大量科学家选择 PEI MAX ，在内部自行制备低成本高效益的转染试剂。多年以来，经过众多业内人士评审的公开研究和出版文献表明，在 HEK293、CHO 和 Sf9 系统中可获得很高的转染效率，在重组抗体和病毒载体生产中稳定性高，可靠性强。PEI MAX 是一种非 GMP 等级转染试剂，适用于基础科学研究及药物研发早期阶段。 PEI MAX 40K 是线性 Polyethylenimine 盐酸盐形式，是线性 Polyethylenimine PEI 25K 的升级产品。相比于 PEI25K，PEI MAX 40K ： 完全水解（去乙酰化）； 盐酸盐形式，具更高的水溶特性； 含更长连续性片段，其质子化氮水平比 PEI 25K 提高 11% 以上 Transporter 5 转染试剂是一种专利的即用型线性 Polyethylenimine（PEI）衍生物。由 PEI MAX 配置而成的即用型无菌试剂，采用 0.1μm PES 无菌过滤器，完全消除支原体污染风险。适用于工艺开发、临床前和早期临床研究，可无缝过渡到 MAXgene 用于 cGMP 生产。MAXgene GMP (cat# 26406/26435) 是一种 cGMP 转染试剂，在 Polysciences 研究等级转染试剂（PEI MAX 或 Transporter 5) 的效率和可扩展性基础上增加了验证工艺和监管流流程，适用于细胞和基因治疗病毒载体的研发和生产。
PEI MAX 粉末配置方法： 将 1g PEI MAX 40K 放入盛有 900 mL 水的玻璃烧杯中 放入搅拌转子，放置于磁力搅拌器上，设置搅拌程序以形成一个较小的漩涡 等待 PEI MAX 40K 完全溶解，通常需要 5 分钟左右 用 25 mL 塑料移液管加入 1 N NaOH 滴定至 pH 6.9~7.1 如果不小心超过 7.1，则使用 1N 的盐酸和新的塑料移液管将 pH 重新滴定至 6.9~7.1 将溶液转移到 1L 玻璃量筒中，加入水定容至 1L 用无菌真空过滤膜过滤配制的转染试剂溶液 按需分装，4°C 储存 注：未经配制的粉末有效期为 2 年。配置成液体后分装在合适的瓶子中，并且保存在 4℃ 的转染试剂将可在 6 个月之内保持性能。如仅用于蛋白定性研究，分装的转染试剂可延长有效使用期至 1 年。经过驯化的无血清培养悬浮细胞转染流程 1.准备工作转染前 2~3 小时，种植细胞密度为 1X106 /mL 于培养容器中。 2. 转染步骤（以 250 mL 摇瓶为例，转染前种植细胞总体积为 25 mL，最终总培养体积为 50 mL） 准备 PEI-DNA 转染混合物（以下操作顺序尤为关键）。 1）在含有 2.5 mL（25mL 的 10%）稀释液的聚丙烯 EP 管中加入 50ug 质粒 DNA（质粒用量建议在 1~2ug/106 细胞之间优化，此处使用 2ug/106 细胞） 2) 轻轻地混匀/振荡溶液 3) 在 DNA 溶液中加入 50~200uL PEI 转染试剂（PEI/DNA 的比例建议在 1~4：1 之间优化，首次推荐使用 2：1 或 3：1） 4) 涡旋振荡 5 秒钟 5) 将管子静置于超净工作台 10~15 分钟，使 PEI-DNA 复合物形成（建议共孵育时间不超过 20 分钟） 6) 用移液器轻轻上下吹打混合液 3 次 注：边晃动摇瓶，边将 PEI-DNA 混合液加入更换了培养基的转染孔中，确保 PEI-DNA 复合物均匀分布，防止局部浓度过高。3. 孵育培养 将细胞培养瓶放入培养箱，摇瓶培养 2~3 小时后，加入 25 mL 新鲜培养基，继续培养。 通常，在转染后 36-48 小时可检测到重组蛋白表达或包装的病毒颗粒。转染后 72-96 小时可观察到最大产量。 产品订购与支持信息： 上海曼博生物医药科技有限公司 电话：021-51769110 QQ： 800182517 手机：18221705797 |
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