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作者：

蔡宋芹

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摘要：

目的: 研究儿童神经母细胞源性肿瘤(neuroblastictumors,NTs)[包括神经母细胞瘤(Neuroblastoam,NB),节细胞神经母细胞瘤(Ganglioneuroblastoma,GNB)和节细胞神经瘤(Ganglioneuroma,GN)]中,MYCN,C-MYC及ALK基因的分子遗传学异常及ALK蛋白的表达,并探讨它们的临床病理学意义. 材料与方法: 应用间期荧光原位杂交(FluorescenceInSituHybridization,FISH)技术检测MYCN(246例),C-MYC(133例)及ALK基因(214例)的分子遗传学异常;利用免疫组化检测126例NT中ALK蛋白的表达情况.分析以上基因的分子遗传学异常及ALK蛋白表达与患者年龄,分期,发病部位,组织学类型,病理分型及预后的相关性. 结果: 246例NT中,未见涉及MYCN基因的染色体易位,但11.0%(27/246)的肿瘤中存在MYCN基因扩增,且均发生在NB中.89.0%(219/246)的MYCN基因非扩增NT中,71.1%(175/219)存在MYCN基因获得,17.9%(44/219)MYCN基因正常.单因素生存分析显示,MYCN基因扩增者预后不良;在MYCN基因非扩增者中,MYCN基因获得者预后好于MYCN基因正常者(P=0.037).27例MYCN基因扩增者中,29.6%(8/27)的患者年龄小于等于18个月,70.4%(19/27)的患者年龄大于18个月(P=0.037),提示MYCN基因扩增多发生在年龄较大的患者中.单因素生存分析显示,NT患者年龄大于18个月者预后不良(P=0.019).59.3%(16/27)的MYCN基因扩增者原发于肾上腺,40.7%(11/27)原发于非肾上腺(P=0.003),提示MYCN基因扩增多发生在肾上腺NT患者中.单因素生存分析显示,肾上腺部位患者预后不良(P=0.010).13例获得INSS分期信息的MYCN基因扩增者中,虽然15.4%(2/13)发生在低分期(Ⅰ,Ⅱ,Ⅳs期),84.6%(11/13)发生在进展期(Ⅲ,Ⅳ期),但二者的差异无显著性(P=0.282),提示MYCN基因扩增可能与患者分期无相关性.单因素生存分析显示,进展期肿瘤(Ⅲ,Ⅳ期)预示预后不良(P=0.043);未分化型,分化差型和分化型NB中,MYCN基因扩增率分别为50%(1/2),15.8%(6/38)和7.1%(3/42)(P=0.127),MYCN基因扩增率在三种分化类型NB中的差异无统计学意义,提示MYCN基因扩增与NB的分化程度无关. 检测了C-MYC基因的133例NT中,未见一例C-MYC基因扩增及易位者,但55.6%(74/133)的NT存在C-MYC基因获得.C-MYC基因获得者(15.3%,9/59)及C-MYC基因正常者(8.1%,6/74)中伴MYCN基因扩增的比例无明显差异(P=0.196),提示MYCN基因扩增与否与C-MYC基因获得与否无明显相关性.单因素生存分析显示,与C-MYC基因正常者相比,C-MYC基因获得无预后意义(P=0.129). 检测了ALK基因的214例NT中,未见涉及ALK基因的染色体易位,但44.9%(96/214)的病例存在ALK基因拷贝数的异常,其中1.4%(3/214)存在ALK基因扩增(均发生在NB中),43.5%(93/214)存在ALK基因的获得.单因素生存分析显示,ALK基因扩增预示预后不良;在ALK基因非扩增者中,ALK基因获得者预后好于ALK基因正常者(P=0.026). 检测了ALK蛋白的126例NT肿瘤组织中(NB94例,GNB28例,GN4例),53.2%(67/126)ALK蛋白表达阳性,单因素生存分析显示,ALK蛋白阳性预示预后不良(P=0.044).NB中ALK蛋白表达阳性率(50.5%,51/101)明显高于GNB和GN(20.0%,7/35)中(P=0.002).未分化型,分化差型及分化型NB中,ALK蛋白阳性率分别为0.0%(0/1),50.0%(9/18)及53.8%(14/26)(P=0.568),提示ALK蛋白表达与NB组织学类型无明显相关性.年龄小于等于18个月者与年龄大于18个月者的ALK蛋白阳性率分别为48.2%(27/56)和49.0%(24/49)(P=0.938),提示ALK蛋白表达与患者年龄无相关性.ALK蛋白阳性表达率在INSS低分期(Ⅰ,Ⅱ,Ⅳs期)患者(33.3%,1/3)与进展期(Ⅲ,Ⅳ)患者(38.1%,8/21)中无明显差异(P=0.873),提示ALK蛋白表达与患者分期无相关性.ALK蛋白阳性率在原发于肾上腺者(39.5%,15/38)与非肾上腺者(46.8%,29/62)中无明显差异(P=0.453),提示ALK蛋白表达与患者发病部位无相关性.3例ALK扩增者的ALK蛋白表达均为强阳性,但52.0%(64,64/123)的ALK非扩增者也检测到ALK蛋白表达,其中包括67.2%(41/64)ALK基因获得者及37.1%(23/64)ALK基因正常者,提示除ALK基因扩增可导致ALK蛋白表达外,NT中尚存在其它机制上调ALK蛋白的表达. 结论: 我国儿童NT中MYCN基因扩增率较低(11.0%);MYCN基因扩增仅见于NB中,但与NB的组织学类型无关.年龄>18个月,进展期肿瘤及肾上腺的NT患者中更易出现MYCN基因扩增;儿童NT中未检测到C-MYC基因扩增及易位,但C-MYC基因获得较为常见(55.6%).MYCN基因扩增与否与C-MYC基因获得与否无明显相关性;ALK基因拷贝数异常(包括扩增和获得)是NT特别是NB中常见的遗传学异常(44.9%).ALK蛋白表达与NB分化程度,患者年龄,INSS分期及发病部位无明显相关性.NT患者诊断时年龄大于18个月,进展期肿瘤(Ⅲ,Ⅳ期),MYCN基因扩增,ALK基因扩增及ALK蛋白阳性均为预后不良因素.MYCN及ALK基因获得者预后均好于正常者;但与C-MYC基因正常者相比,C-MYC基因获得无预后意义.NT中ALK基因扩增率很低(1.4%),但ALK蛋白表达率较高(53.2%),提示除ALK基因扩增可导致ALK蛋白表达外,NT中尚存在其它机制上调ALK蛋白的表达.

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关键词：

儿童患者 神经母细胞源性肿瘤 MYCM基因 C-MYC基因 ALK蛋白 分子遗传学 临床病理

学位级别：

硕士

学位年度：

2013