质谱测试流程

1. 制样送样前务必先来生物站C105沟通细节，以免样品不合规不能分析或影响分析结果，未按标准方法处理样品引起的对平台仪器的损害，课题组需承担机时和仪器维修的责任。

2. 沟通后登陆南开大学大型仪器平台进行送样预约，详细填写送样信息。

3. 每周一10:00送样，样品周二开始制备和分析；因特殊原因周一上午未能送样，可在周四10:00送样，样品下周二制备。电子版质谱分析样品登记表发送至邮箱 [email protected]，纸质版导师签字随样品一起送至C105。

4. 仪器状态正常，2周内出结果。结果发送至邮箱，可自行下载，如需原始数据请先联系仪器负责人，按照约定时间到生科院C105拷取数据。需自备格式化后的U盘。

5. 保存好原始数据，质谱平台电脑数据保存两个月后将会删除。

6. 有相关问题，可以在南开生科院质谱平台微信群中提出，或联系邮箱[email protected]。

送样单填写要求

1. 所有送样样品均需要附胶图和预估含量（参考附图1），附上参考信息，例如定量Bradford/BCA定量值；IP 样品需Western Blot图以便证明IP实验是否成功。

2. 所有溶液内样品应写明所用buffer的具体成分，以便制样时参考。

3. 所有胶内样品样品胶体积不易过大：短胶样品体积100 μl以下为宜；单条带染色胶内样品体积20-30 μl及以下为宜。若体积过大影响结果自行承担。跑胶建议隔开上样，两个样品之间隔一个空白泳道。

4. 跑短胶参考示意图：

跑短胶原则：预染marker最大的条带跑进分离胶1mm时停止跑胶，此时浓缩胶与分离胶分界线距Marker下沿约0.5cm，降低电压跑胶（80-100 V），不染色

5.送样单上注明分析要求、拷贝搜库fasta文件、定量需要、是否分开或合并原始数据进行搜库等。

附图1：样品考染/银染参考图。

样品处理注意事项

1. 蛋白胶染色不要用重复使用过的染液，一定要用新的染液

2. 配置脱色液、buffer或清洗容器，要用质谱级试剂，至少要用ddH2O

3. 实验过程中用到的容器、皿、刀片尽量要用新的，按照ddH2O-异丙醇-ddH2O顺序清洗

4. 禁止用洗洁精、洗衣粉等洗剂清洗实验过程中所用的容器，样品中禁止使用含有SDS、Triton、Tween成分，因此导致的机器污染要做出相应赔偿

5. 处理过程中避免对着蛋白胶或样品说话，使用新的手套，避免直接触碰到样品胶条，不得已可以触碰胶的空白处

6. 胶内样品切胶尽量避免切到空白胶，减小胶体积。以免体积过大影响酶切效率。

7. 胶条放到离心管，加入20微升质谱级水(或ddH2O)，防止胶条过干。