酵母RNA的提取及组份鉴定(稀碱法)

您所在的位置:网站首页 用酵母提取rna优点 酵母RNA的提取及组份鉴定(稀碱法)

酵母RNA的提取及组份鉴定(稀碱法)

2024-07-17 06:11:37| 来源: 网络整理| 查看: 265

实验原理由于RNA的来源和种类很多,因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉淀析出,此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA,用这两种方法所提取的核酸均为变性的 RNA,主要用作制备核苷酸的原料,其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液,90℃提取3-4h,迅速冷却,提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解,然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。酵母含RNA达2.67-10.0%,而DNA含量仅为0.03-0.516%,为此,提取RNA多以酵母为原料。

RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解,从水解液中可用定糖,定磷和加银沉淀等方法测出上述组份的存在。试剂和器材一、试剂0.04M NaOH溶液;95%乙醇;1.5M硫酸;浓氨水;0.1M硝酸银。酸性乙醇溶液:30mL乙醇加0.3mL HCl。三氯化铁浓盐溶液:将2mL 10%三氯化铁(FeCl3· 6H2O)溶液加入400mL浓HCl。苔黑酚(3,5-二羟基甲苯)乙醇溶液:称取6g苔黑酚溶于95%乙醇100mL。定磷试剂:17%硫酸:将17mL浓硫酸(比重1084)缓缓倾入83mL水中;2.5%鉬酸铵:2.5g鉬酸铵溶于100mL水中;10%抗坏血酸溶液:10g抗坏血酸溶于100mL 水,棕色并保存溶液;临用时将三种溶液和水按下列比例混合:17%硫酸:2.5%鉬酸铵:10%抗坏血酸:水=1:1:1:2(V/V)。二、材料干酵母粉。三、器材移液管0.2mL(×1),2.0mL(×1), 1mL(×4); 量筒10 mL(×1), 50mL(×1); 滴管;水浴锅;离心机。操作方法一、酵母RNA提取称5g干酵母粉悬浮于30mL 0.04M NaOH溶液中并在研钵中研磨均匀。悬浮液转入三角烧瓶,沸水浴加热30min,冷却,转入离心管。3000转/分,离心15分钟后,将上清慢慢倾入 10mL酸性乙醇,边加边搅动。加毕,静置,待RNA沉淀完全后,3000r/min离心3min。弃去上清液。用95%乙醇洗涤沉淀两次。再用乙醚洗涤沉淀一次后,用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗抽滤,沉淀在空气中干燥。称量所得RNA粗品的重量,计算:

二、RNA组份鉴定 取2g提取的核酸,加入1.5M硫酸10mL, 沸水浴加热10分钟制成水解液,然后进行组份鉴定。 1.嘌呤碱:取水解液1mL 加入过量浓氨水。然后加入1mL 0.1M硝酸银溶液,观察有无嘌呤碱银化合物沉淀。 2.核糖:取水解液1mL,三氯化铁浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液0.2mL。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变成绿色。 3.磷酸:取水解液1mL,加定磷试剂1mL。在水浴中加热观察溶液是否变成蓝色。

酵母rna 互联网 喜欢作者 我要约稿 上一篇 | 下一篇


【本文地址】

公司简介

联系我们

今日新闻


点击排行

实验室常用的仪器、试剂和
说到实验室常用到的东西,主要就分为仪器、试剂和耗
不用再找了,全球10大实验
01、赛默飞世尔科技(热电)Thermo Fisher Scientif
三代水柜的量产巅峰T-72坦
作者:寞寒最近,西边闹腾挺大,本来小寞以为忙完这
通风柜跟实验室通风系统有
说到通风柜跟实验室通风,不少人都纠结二者到底是不
集消毒杀菌、烘干收纳为一
厨房是家里细菌较多的地方,潮湿的环境、没有完全密
实验室设备之全钢实验台如
全钢实验台是实验室家具中较为重要的家具之一,很多

推荐新闻


图片新闻

实验室药品柜的特性有哪些
实验室药品柜是实验室家具的重要组成部分之一,主要
小学科学实验中有哪些教学
计算机 计算器 一般 打孔器 打气筒 仪器车 显微镜
实验室各种仪器原理动图讲
1.紫外分光光谱UV分析原理:吸收紫外光能量,引起分
高中化学常见仪器及实验装
1、可加热仪器:2、计量仪器:(1)仪器A的名称:量
微生物操作主要设备和器具
今天盘点一下微生物操作主要设备和器具,别嫌我啰嗦
浅谈通风柜使用基本常识
 众所周知,通风柜功能中最主要的就是排气功能。在

专题文章

    CopyRight 2018-2019 实验室设备网 版权所有 win10的实时保护怎么永久关闭