碱性磷酸酶(ALP) |
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碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)基因来源于 Antarctic Bacterium TAB 5,在大肠杆菌中异源表达,该酶能够催化 DNA 和 RNA 的 5′-或 3′- 磷酸单酯去磷酸化,也可以水解核糖、脱氧核糖核苷三磷酸(NTPs 和 dNTPs)。它作用于 5 ‘突出末端、5 ‘凹陷末端和平齐末端。 TAB 5 碱性磷酸酶可应用于许多分子生物学实验中如克隆或探针末端标记等,以用来去除 DNA 或 RNA 磷酸化的末端。在克隆实验中,去磷酸化后可以阻止线性化质粒 DNA 再自连接。它还可以用来降解 PCR 反应体系中残留的 dNTPs,以为 DNA 测序准备模板。TAB5 碱性磷酸酶在 70℃ 下加热 5 min 就会完全不可逆失活,所以在开始连接反应或末端标记实验之前无需对该酶进行去除操作。 产品储存:-25~-15℃储存,有效期2年(避免反复冻融)。 储存缓冲液:10 mM Tris-HCl (pH 7.4,25℃), 1 mMMgCl2, 0.01 mM ZnCl2,50% glycerol. 活性定义 在 37℃ 条件下,30 min 内能使1μg经 HindIII (产生 5′ 突出末端)、HincII (产生平齐末端)或 PstI (产生5’ 凹陷末端)消化的 pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量定义为1个活性单位(U)。 去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制 ; 95%的DNA再环化(通过转化 E.coli 细胞来检测)。 蛋白分子量:TAB5 碱性磷酸酶的单体分子量为 35 kDa。 热失活:70℃,5 min。 质量控制 核酸外切酶活性:5 U 的本品和 1μgλ-HindIII digest DNA 在 37℃下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化; 核酸内切酶活性:5 U 的本品和1μg λ DNA 在 37℃下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化; 切口酶活性:5 U 的本品和 1μg pBR322 在 37℃ 下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化; RNase活性:5 U 的本品和 1.6μg MS2 RNA 在 37℃ 下反应 16 小时,RNA 的电泳谱带不发生变化; 大肠杆菌DNA残留检测:5 U 本品中残留的核酸经 E.coli 16s rDNA 特异性的 Taq Man qPCR 检测,E.coli 基因组残留≤0.1 pg/5 U。 细菌内毒素(Endotoxin):LAL-Test,中国药典 2020 版第四部凝胶限度试验法通则(1143),细菌内毒素含量 ≤10 EU/mg。 |
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