(□) 中空纤维素膜 Vmax> 1,000 L/m2

样品pH与电导率优化

样品的pH和电导率都有可能会对除病毒滤器载量有影响。以图2案例为例，对同一单抗产品使用相同滤器进行过滤，样品浓度一致，分别在pH为4.3和5.3的条件下进行实验。结果发现pH为4.3的条件下，过滤载量远远大于pH 5.3的条件。电导率也同样可以对除病毒滤器造成如此大的影响，不同的滤器和样品，最适的pH、电导率不一样，需从实际出发，考察最适pH、电导率以降低成本。

图 2某样品在不同pH条件下的过滤载量

样品浓度选择

生产过程中，在需要的蛋白量相同的情况下，蛋白浓度越高，样品体积就越小，需要的储液袋，储液罐体积就越小，工艺时间也会缩短，因此工艺都在往高浓度方向发展。一般来说，较高的蛋白浓度会导致较低的过滤速率。如图3所示，蛋白浓度为10.25 mg/mL的通量从220 LMH迅速降低至10 LMH，而浓度为6.895 mg/mL的蛋白样品在此时仍有150 LMH的通量。由此可见，就此工艺而言，样品浓度为7 mg/mL左右时过滤载量较优。若想找到最优范围，仍需要选择其他浓度进行实验。因此，除病毒过滤需要结合工艺时间、成本等因素找到合适的浓度范围，使性价比最高。

图 3某样品在不同浓度下的过滤通量

添加剂选择

若蛋白样品不稳定，容易产生聚体，可能会很大程度地影响除病毒滤器载量。我们可以通过添加氨基酸（精氨酸、组氨酸等）、糖类或者表面活性剂来稳定蛋白，从而提高滤器载量。

预过滤器的选择

预过滤滤器对纳滤过滤器的性能有很大的影响，使用得当可以明显降低纳滤过滤器面积的使用。预过滤的目标是去除各种杂质或污染物，如蛋白质聚集物、DNA和其他微量物质。不同的预过滤器适合处理的料液不同。例如，如图4所示，Viresolve® Pro Micro Shield H 适合处理高pH高电导率的样品，而Viresolve® Pro Micro Shield适合处理低pH低电导率的样品3。

图 4 Viresolve® Pro Micro Shield H和Viresolve® Pro Micro Shield适合的pH和电导率

预过滤器的大小也会对除病毒滤器载量造成很大的影响，越大的预过滤器面积会使除病毒滤器载量越大。以图5为例，预过滤与除病毒滤器比例为4：1时，明显通量大于1:1的。结合滤器价格分析，若选择4：1增加的预过滤器价格小于选择1：1除病毒滤器增加的价格，则可考虑选择4：1的比例进行除病毒过滤。

图 5预过滤器比例对某蛋白过滤载量的影响

总结

在本文中，我们探讨了影响除病毒过滤器载量的不同因素，也分别举了几个例子来展示这些因素对载量可能的影响，从这些例子我们可以看出滤器，样品pH和电导率，样品浓度，添加剂，预过滤器的不同都会对除病毒过滤造成明显的差别。若要使生产时的除病毒过滤工艺成本最低，需综合考虑各个因素的相互影响。

白帆生物生产车间目前有3条2000L一次性生产线，未来可达6*2000L，除病毒过滤阶段拥有Sartorius的FlexAct VI和FlexAct VR两台设备，能全自动进行低pH病毒灭活和除病毒过滤操作。一次性的自动化操作单元，大大降低了污染风险，减少了样品在不利环境中的暴露时间以及不必要的清洁验证，使得除病毒过滤操作更快速、安全、高效。

作为国内一次性使用技术与商业生产及CDMO服务结合的时代领军者，白帆生物与Cytiva和Satorius等国际企业强强联合，将“NONCROS无交叉抗体工厂”的概念变为现实，引入现代化一次性使用系统生产线，建立上海最大的单抗生产基地之一，该基地既可满足集团内产品的生产需求，也致力于为同行提供单抗CDMO服务，协助同行共同发展。

参考文献

1. 国家药品监督管理局.《血液制品去除／灭活病毒技术方法及验证指导原则》. 国药监注.2002;160.

2. Bruno F. Marques, David J. Roush, and Kent E. Go¨klen.Virus Filtration of High-Concentration Monoclonal Antibody Solutions.Biotechnol. Prog.2009; 25,483-491.

3. Millipore. Vmax™ Constant Pressure Testfor Sizing Viral Clearance Filters.

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本文由白帆生物提供，作者李世燕。首发于“制药业”平台，转载请注明出处。欢迎关注“制药业”公众号，获得最新制药业创新技术、新闻动态等热点话题。

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