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(共25张PPT)复习巩固1.2.2微生物的培养技术及应用微生物的选择培养和计数壹、选择培养基贰、稀释涂布平板叁、分解尿素的细菌的分离与计数肆、分解纤维素的细菌的分离选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基，称为选择培养基。内容选择培养基依据原理：不同的微生物有不同的营养需求或对某种化学物质有不同的敏感性。a.分离耐高温菌，在高温条件培养。b.分离对抗生素具有抗性的菌种，加该抗生素(如链霉素或青霉素)进行分离。c.在培养基中加入质量分数为10%的酚，可以抑制细菌和霉菌的生长。d.纤维素作为唯一碳源和能源的培养基，分离能分解纤维素的细菌。e.无氮培养基(培养基完全不含氮元素)，能分离固氮的细菌。f.只含尿素而不含其他氮元素的培养基，选择分解尿素以获取氮的微生物(能合成脲酶的微生物可以分解尿素)。选择培养基筛选微生物的方法在培养基中加入某种化学物质改变培养基中的营养成分改变微生物的培养条件小任务阅读书本17-19页，以小组进行讨论，回答以下问题：a.稀释涂布平板法的操作要点（操作过程中要特别注意什么？）b.实验的原理；c.实验过程用箭头画流程图；d.实验注意事项有哪些？涂布器稀释涂布平板法将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。稀释涂布平板法培养基菌落涂布平板法平板划线法采用唯一氮源为尿素的选择培养基来培养。分离出能在此培养基中生长、繁殖的微生物。实验原理分解尿素的细菌的分离和计数（NH2）2C=O + H2O2NH3 + CO2脲酶分解尿素的细菌的分离和计数采集土壤制备悬液制备系列稀释液选择培养采用选择培养基培养接种涂布平板培养与观察计数菌落选取菌落数为30-300的一组为样本进行统计分解尿素的细菌的分离和计数思考2.此选择培养基的成分如何调整？1.从哪里取样？4.如何鉴定该选择培养基上生长的是能分解尿素的微生物？3.尿素如何除菌？从有哺乳动物排泄物的地方取得土样尿素为唯一氮源把琼脂换成琼脂糖G6玻璃砂漏斗过滤培养基中加入酚红指示剂，周围出现红色环带的菌落是能分解尿素的。复习巩固分离、计数微生物——稀释涂布平板法无法计数 159 17 2 0无法计数 141 13 1 0无法计数 150 11 3 19ml无菌水加入0.1ml稀释液例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？注意：1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。2.计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。每次稀释都要换一支吸管（159+141+150）÷3×10×105=1.5×108个/g注意事项用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30~300的平板进行计数。解题时易出现以下误解:(1)只得到1个菌落数在30~300的平板是错误的。错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶发因素的影响。(2)得到3个或3个以上菌落数在30~300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30~300”之间，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。可见，并不是只要得到3个“菌落数在30~300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30~300的平板”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。分解纤维素的细菌的分离1.原理(1)土壤中能分解纤维素的微生物，都能分泌 ，将纤维素分解成小分子糖类物质以满足自身生命活动的需要。(2)培养基：以 为唯一碳源的选择培养基。2.纤维素分解菌的鉴定：刚果红染色法，即通过是否产生 来筛选纤维素分解菌。其原理是：纤维素分解菌↓刚果红纤维素→ 红色消失，出现_______红色复合物透明圈纤维素酶纤维素透明圈实验流程两种微生物筛选方法的比较项目 土壤中分解尿素的细菌的分离 分解纤维素的微生物的分离方法 使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养 利用富含纤维素的选择培养基进行培养原理 土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素为氮源正常生长，从而起到选择作用 因为培养基中含有丰富的纤维素，因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖1.若要通过稀释涂布平板法分离纯化土壤中的微生物，其正确操作步骤是（ ）①土壤取样②称取1g土壤加入盛有99mL无菌水的锥形瓶中，制备102土壤稀释液③吸取0.1mL土壤稀释液进行平板涂布④依次将土壤稀释液稀释至浓度为103、10-4、10-5、10-6、107的溶液A.①②③④B.①③②④C.①②④③D. ①④②③2.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( )A. 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B. 取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上C.将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24~48小时D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析：A、首先要进行培养基的制备、用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，A正确;B、然后进行对土壤稀释液进行涂布于各组平板上，B正确;C、将实验组和对照组平板倒置，37C恒温培养24~48小时，C正确;D、确定对照组无菌后，选择菌落数在30~300的进行记数，求起平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，D错误.3.现有一升水样，梯度稀释至103倍。各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57个，则每升原水样中大肠杆菌数为( )个。A. 560B.5.6x105C.5.6x107D.5.6x108解析：题中梯度稀释的倍数是103，三个菌落的平均数=55+56+57/3=56，则每毫升样品中菌株数56/0.1x103=5.6x105个，所以每升土壤浸出液中的菌株数=5.6x105x103=5.6x108个。故选:D。4.有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境，研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解，分离能降解苯磺隆菌株的实验过程如下图所示。请回答问题:要检测土样中的细菌含量，应采用 法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是 。然后，将1mL土壤溶液稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为 个。涂布分离检测培养基平板灭菌是否合格3.8×107解析：涂布分离平板法常常用来进行微生物的分离和计数。为检验培养基平板灭菌是否合格，常常需要在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，观察有无菌落形成，若没有菌落形成则表明培养基灭菌合格，否则则不合格。根据题意，每升土壤溶液中的活菌数为:(39+38+37)÷3x100÷0.1x1000=3.8x107个。

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