德国MMI厂家的CellCut激光显微切割系统，可以直接切割目的位置的组织或单细胞，继而通过RNA-Seq（转录组测序）、WGS（全基因组测序）、微阵列芯片、qRT-PCR、MS（蛋白质谱）等方法，获得更加原始、更加真实的组学数据。CellCut激光显微切割技术具有较高的切割效率和高的收集成功率，并维持了较好的生物大分子活性，助力肝细胞再生机制、肝细胞移植刺激肝脏再生机制、丙型肝炎病毒慢性感染与清除、人类肝脏及其疾病中的芳香酶表达等的研究。

一、MMI CellCut激光显微切割系统助力肝细胞再生机制的研究

2020年Armanda Szucs等人发表的文章“Postnatal, ontogenic liver growth accomplished by biliary/oval cell proliferation and differentiation”研究了肝细胞的卵圆形细胞是否能够补偿因2-乙酰氨基芴（AAF）治疗而停滞的原癌性肝生长，且是否会受到已知可在若干反应中促进肝生长的胆酸（CA）的影响。在本研究中，作者将研究门静脉胆管/卵细胞（periportal biliary/oval cells (B/OC)）是否可以促进大鼠体内肝的生长。由于B / OC的增殖和分化是由组织学变化决定的，因此对肝脏的形态进行了彻底分析，然后进行了免疫组织化学分析、形态分析、增殖分析和基因表达研究。

其中，基因表达研究采用的是实时qRT-PCR的方法，该实验过程中样品的获取至关重要。本文中作者通过使用MMI CellCut激光显微切割系统从肝脏冰冻切片中切割B / OC和肝细胞（〜100.000μm2），然后进行总RNA的提取，反转为cDNA，最后通过qRT-PCR的方法完成了基因表达的研究。结果表明与对照组相比，每个实验组的两个细胞群中的TGR表达均被下调（图1A）。 然而，FXR被认为是转导胆汁酸的增殖信号，在AAF / CA大鼠的B / OC上被上调，而在肝细胞上的表达下降（图1B）。同样，实时qRT-PCR证实AAF处理后HGF和SCF表达显著增加（图1C）。 FXR表达的改变表明FXR可能有助于诱导干细胞驱动的再生。AAF处理的大鼠中HGF，IL-6和SCF表达增加，而TNFR1和IFNg的表达未检测到这种升高，表明HGF可能是驱动肝细胞和卵圆形细胞增殖的最有效的生长因子，IL-6和SCF也具有这种功能。最终表明，在本研究中的AAF / CA实验模型中，衰老相关生长因子产生和FXR在B / OC上调的结合可能是B / OC补偿性扩张的主要驱动力。

总之，本文作者描述了一种新的机制，即FXR在肝细胞和B / OC上的反向表达，当肝细胞受损时，它可能有助于激活肝干细胞。 当产后生理生长过程中肝细胞增殖受阻，导致干细胞增殖/分化介导的肝细胞生长时，就会激活该机制。

图1. 胆汁酸受体和衰老相关蛋白的相对mRNA水平。 A.B. 在实验的第10天，对显微解剖的肝细胞（H）和胆/卵细胞（B / OC）中的TGR5（A）和FXR（B）mRNA表达进行qRT-PCR分析。C.在实验的第10天，对全肝样品中IL-6，SCF和HGF mRNA表达的qRT-PCR分析。

二、MMI CellCut激光显微切割系统助力Thy11细胞移植刺激肝脏再生机制研究

2016年Norihisa Ichinohe等人发表的文章“Transplantation of Thy11 Cells Accelerates Liver Regeneration by Enhancing the Growth of Small Hepatocyte-Like Progenitor Cells via IL17RB Signaling”对Thy11细胞的移植可加速肝脏再生的机制进行了研究。小肝样细胞祖细胞（SHPC）在逆转录（Ret）/ 70％部分肝切除术（PH）处理的大鼠肝脏中短暂形成簇。作者将经D-半乳糖胺处理的大鼠肝脏中分离的Thy11细胞移植到Ret / PH处理的大鼠的肝脏中时，受体肝的质量在移植后的前30天短暂增加，这表明肝脏的再生得到了增强。在这里，作者讨论了Thy11细胞移植如何刺激肝脏再生。作者发现，移植后第14天，肝脏中SHPC簇的数量和大小增加。基因芯片分析表明，在移植了Thy11细胞的肝脏的SHPC中，白细胞介素17受体b（IL17rb）的表达显著增加。作者随后搜索表达配体的细胞，发现正弦内皮细胞（SEC）和库普弗细胞（Kupffer）分别表达Il17b和Il25。从Thy11细胞培养的条件培养基中分离的细胞外囊泡（EV）分别在SEC和Kupffer细胞中诱导IL17b和IL25表达。此外，EV增强了小肝细胞（SHs）中IL17rb的表达，SHs是肝细胞的祖细胞。在培养中，IL17B刺激了SH的生长。这些结果表明，Thy1-EVs通过靶向SEC，Kupffer细胞和SHPC来协调IL17RB信号传导，从而增强肝脏再生。实际上，在Ret / PH处理的大鼠肝脏中，Thy1-EVs的使用增加了SHPC簇的数量和大小。移植后60天，大多数扩张的SHPC进入细胞衰老，肝脏扩张恢复到正常大小。总之，Thy11细胞移植通过IL17RB信号传导促进内在肝祖细胞的增殖，从而增强了肝脏的再生能力。

在本项研究中，关于基因芯片分析的样本获取，作者采用了MMI激光显微切割系统对7mm厚的肝脏组织冷冻切片进行了切割，获取了SHPC细胞群来提取总RNA进行基因芯片分析捕获细胞的基因表达情况（图2）。

图2. Thy11细胞移植后SHPC的基因表达。图像反映了接受Thy11细胞移植的肝脏在激光显微切割之前（A-1）和之后（A-2）去核SHPC的代表性图像。 A-1中的虚线圈选了SHPC群集。（B）表示代表性的生长因子和细胞因子的受体选择的基因的热图。相对基因表达以log2标度显示。mRNA表达的增加表示为红色阴影，而减少表示为蓝色阴影。（C）通过实时定量PCR证实了接受Thy11细胞移植的肝脏的SHPC和没有SHPC的肝细胞中IL17rb的表达。星号表示统计学上的显著差异， p ＜0.05。

三、MMI CellCut激光显微切割系统助力丙型肝炎病毒慢性感染与清除的研究

2014年Timothy Sheahan等人发表的文章“Interferon Lambda Alleles Predict Innate Antiviral Immune Responses and Hepatitis C Virus Permissiveness”对干扰素lambda（IFNL）基因座的遗传变异与丙型肝炎病毒（HCV）慢性感染和清除的机制进行了研究。HCV感染可导致病毒慢性感染或清除。尽管宿主遗传学，特别是IFNL基因座的遗传变异与HCV的自发清除和治疗成功有关，但指导这些临床结果的机制仍不清楚。因此，作者利用MMI接近单细胞分辨率的激光捕获显微切割驱动的无偏系统病毒学方法，分离并转录定位了HCV感染和邻近的原代人肝细胞（PHHs）（图3）。先天性抗病毒免疫信号主导了转录反应，但HCV感染细胞和邻近细胞之间在数量和多样性上存在差异。通过比较感染频率高和低的供体，确定与更有效的抗病毒控制相关的分子特征。来自临床上不适宜IFNL基因型的供体的细胞被感染的频率更高，并且表现出抑制的抗病毒和细胞死亡反应。这些数据表明，早期病毒与宿主的相互作用，特别是宿主遗传和先天免疫的诱导，决定了HCV感染的结果。

图3. LCM分离HCV感染的PHHs。A.HCV依赖荧光再定位（HDFR）报告者。HCV感染的表达HDFR的PHH的相位差（左）和荧光（右）图像。填充箭头，HDFR核易位HCV感染细胞。空箭头，HDFR未转移到相邻单元格。B.激光捕获显微切割（LCM）示意图。收集表面对载玻片膜有粘性，便于切割时捕获。C.模拟细胞、HCV感染细胞和邻近细胞的捕获示意图。D.从LCM到阵列的工作流示意图。E.从左到右逐步记录模拟细胞、HCV感染细胞和邻近细胞的LCM。F.LCM样品裂解液中HCV基因组的定量RT-PCR检测。每个点代表每10个单元格的平均值。每个时间点（感染后天数，dpi）的供体数量（供体n）显示在灰色框中。星号表示ANOVA确定的统计显著性（p