邻甲酚酞又称为邻甲苯酚酞(C22H18O4mol346.38)白色或黄色粉末，易溶于乙醇、乙醚；不溶于水，溶于稀碱呈蓝色，pH值8.2-9.8（颜色由无色至红色）；吸收峰566（381）mm。邻甲酚酞络合剂是金属络合指示剂,同时也是酸碱指示剂。在酸性溶液中与钙及镁螯合,生成紫红色螯合物。

一种邻甲酚酞络合剂的制备方法，步骤如下：

⑴将500g邻苯二甲酸酐和600g邻甲苯酚混合后，再搅拌下慢慢加热使其溶解，放置，另取600g无水氯化锌再搅拌下迅速加入上述混合物中，在105‑110℃加热5‑6小时，然后加入1000ml水搅拌，使其溶解，将其反应物倒入10L水和500ml浓盐酸的溶液中，即析出固体沉淀，过滤。用水洗涤数次，将沉淀移入研钵中，研碎后，加500ml稀盐酸（15%体积分数的盐酸）和500ml水，再过滤，若产物不是固体，是油状物，可加热至沸，再冷至5℃，过滤得粗品；

⑵将粗品置于10L不锈钢容器中，加入1500ml10%氢氧化钠，搅拌或加热使其溶解，加5000ml水冷却后，用折叠滤纸过滤，用2000ml水洗涤，在滤液中加入盐酸，使对石蕊试纸显酸性，冷却后，滤出结晶，用水洗涤，晾干干燥，得400‑500g邻甲酚酞络合剂成品。

1仪器与试剂

仪器:SP-2102UV紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)。

试剂:邻甲酚酞络合剂(OCPC)、8-羟喹啉(8-HQ)、二乙胺、甲醇、碳酸钙、浓盐酸。所用试剂均为分析纯。

动物:昆明种小鼠,购于天津市公共卫生监督所实验动物中心。

2试剂的配制

钙标准液的配制:无水碳酸钙于110°C干燥12h,精密称取2.5g,置1000ml容量瓶中,加水100m1,滴加浓盐酸5ml,溶解,加水至刻度,摇匀,溶液中钙浓度为lmg/m1。钙显色剂的配制:量取OCPC试液(称取OCPC32.5mg,8-HQ1.1g,加水250ml,加浓盐酸7.5m1,充分搅拌溶解后用水补足500m1,混匀)、二乙胺试液(量取二乙胺2lml,加水至500ml,混匀)、甲醇按1.5∶1.5∶1.0的比例配成钙显色剂。临用前配制。

3实验方法

3.1小白鼠血钙测定法

将小白鼠断头,使血液滴入1.5ml离心管中,每只约取血0.5～1ml,3000r/min离心l5～20min。取血清50μl,加钙显色剂4.0ml,摇匀,立即在570nm波长处测定吸收度。每次实验同时取各种浓度的钙标准液与血清样品同条件操作做标准曲线,求得血钙值。

3.2工作曲线绘制

分别吸取2.5、5.0、7.5、10.0、15.0ml钙标准溶液加入到100m1容量瓶中,用去离子水稀释至刻度摇匀,稀释成25、50、75、100、150μg/m1不同浓度的钙标准液。进行多次测定,绘制工作曲线,利用标准曲线法测定血清中钙的含量。

采用以下实验步骤：(1)测定溶液的准备；(2)样品吸光值差测定：取0.21mmol/L邻甲酚酞络合剂溶液3mL加入50mL棕色比色管中，加入γ-CD溶液3mL，再以pH＝9.51碳酸钠/碳酸氢钠缓冲溶液定容至25mL，摇匀后于30℃恒温水浴静置15min，在576nm处以缓冲溶液为参比测定吸光度。空白实验中以3mL蒸馏水替代γ-CD溶液，其余实验操作相同。吸光度差值(ΔA)＝空白溶液吸光度(A′)-样品吸光度(A)(3)标准曲线的绘制：在各管中分别加入1.5mmoL/L、3mmoL/L、4.5mmoL/L、6mmoL/L、7.5mmoL/L、9mmoL/L的γ-CD溶液，以上述方法测定各吸光值差，以环糊精浓度为横坐标，吸光度差ΔA为纵坐标作图，得到一正相关曲线，作为γ-CD标准曲线。

[1][中国发明]CN201210440789.3邻甲酚酞的制备方法

[2]王丽霞,刘安军,王稳航,赵淑静.小鼠微量血清钙的邻甲酚酞络合剂测定法[J].微量元素与健康研究,2004(04):45-46.

[3]CN201711265167.0一种基于邻甲酚酞褪色法的γ-环糊精含量分光光度测定方法