基于 CRISPR 的基因组编辑技术入门 |
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作为一种包括Cas9核酸内切酶和非编码的导向RNA(gRNA)的简单双组分体系,经过基因改造的II型CRISPR/Cas体系可用于在预先设定靶向的目标序列处切割基因组DNA。gRNA由两种分子组分:一种靶向互补的CRISPR RNA(crRNA)和一种辅助的反式激活crRNA(tracrRNA)。gRNA和PAM (NGG)基序引导Cas9核酸酶至基因组特定位置,形成复合物,之后局部链分离(R-loop),Cas9核酸酶在PAM 位点上游3个碱基的位置形成一种双链DNA断裂(DSB)。因此,您既可以通过突变赋予靶标基因新的功能,实现敲除效果,也可以引入外来或合成的基因组序列,研究新的应用。 CRISPR也可灵活用于非编辑应用,例如基因调控或者RNAi相关的研究。Cas9核酸酶可以连接到不同的功能域(激活子或者抑制子)上,或者也可以设计gRNA用于直接切割miRNA。 |
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