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主笔：于浩、赵书雪

具体的反应方程式如下：

H2O2 + Fe(III)-E → H2O + O=Fe(IV)-E(.+) H2O2 + O=Fe(IV)-E(.+) → H2O + Fe(III)-E + O2

1、试剂

PBS缓冲液（用储藏液稀释，具体参考：常见溶液、缓冲液配制方法）

50 mM过氧化氢：（5×，用多少配多少）

H2O2是危险品无法随意购买，H2O2本身会分解，因此浓度通常与试剂瓶上面显示的不符，需要先根据摩尔吸光系数（Ɛ240nm = 39.4 M-1cm-1）（不同来源资料的Ɛ会有差别，但差异不大，对结果无影响）来进行浓度标定。50 mM的过氧化氢在240 nm处的吸光值应该是2.0，10 mM应该是0.4。标定后，根据需要测定的样品数量，配置50 mM的过氧化氢储藏液。

危险品使用需要严格遵守"用多少配多少"的原则!

2、仪器

紫外分光光度计，微量比色杯（狭缝4 mm，1.4 mL比色皿），离心机，组织研磨仪

1、将0.1 g的生物样本加入到2 mL的研磨管中，加入1 mL PBS缓冲液和研磨球，在高通量组织研磨仪（60 Hz）上面进行研磨。

具体的研磨参数参考：生物样本破碎、研磨、匀浆方法与流程 / 微量组织研磨（高通量组织研磨仪）

2、10,000 g离心10 min，将上清转移到新的离心管中，置于冰上保存。

3、打开紫外分光光度计开关预热，将波长调整至至240 nm，利用PBS缓冲液调零，准备试剂（室温放置）。

4、按照下面的体系来配置反应体系

5、计算CAT的酶活：酶活定义为1 min内催化1 μmol底物（过氧化氢）的酶量为一个单位U

酶活计算公式：U =（ΔA×V×1000）/(Ɛ×Ve×L×t）

U：样本的比酶活，单位为U/mL

ΔA：样品组240 nm处的吸光值差值（0 min吸光值 - 2 min吸光值）

V：反应体系的体积（L），本方案为0.001 L

Ɛ：愈创木酚氧化产物在470nm的摩尔消光系数39.4 M-1cm-1

Ve：酶的体积（mL），本方案为0.2 mL

L：比色皿光程（cm），本方案为1 cm

t：反应时间（min），本方案为2 min

按照本方案：酶液为0.2 mL，反应时间为2 min，简化之后的样本比酶活计算公式为：

U = 63.45×ΔA（U/mL）

注意：

酶活过低可以增加反应体系中酶液的体积，也可以增加最初的用来破碎的组织的质量到0.2 g，也可以增加反应时间，但是如果更改了酶液体积或者反应时间之后计算公式就要更改。

如果是组织样本按照上面的公式计算没有问题。如果我们的最初的样本是液体培养的菌丝，那么菌丝的含水量对于最终结果会有影响，一定要保证每个样本中的含水量是一致的。