（一）香豆素的提取： 通常根据香豆素类化合物的溶解性、挥发性和升华性及其内酯结构的性质来设计其提取分离方案。有溶剂提取法、水蒸气蒸馏法和碱溶酸沉淀法等。 1）水蒸气蒸馏法提取香豆素： 因小分子的香豆素类有挥发性，故可采用蒸馏法进行提取。注意：水蒸气蒸馏法适应面窄。且提取温度高，受热时间长，可能会引起化合物结构的破坏，现在少用。 2）碱溶酸沉法： 香豆素类具有内酯环，可溶于热的碱水中，可用0.5%NaOH溶液加热提取。 碱溶酸沉法的条件难以控制，如果条件剧烈，会造成酸化后不能环合的不可逆现象，要慎重使用。重点介绍最常用的溶剂提取法。 3）香豆素溶剂提取法： 香豆素类化合物一般采用甲醇、乙醇或者水作为提取溶剂，从植物中进行提取。合并提取液后，回收溶剂得到提取物；再用石油醚、乙醚、乙酸乙酯和正丁醇等，极性由低到高的有机溶剂依次萃取。 （二）香豆素的分离： 以上每个提取部分所含的化合物极性类似，需要进一步色谱分离，才能得到单体化合物。常用的分离方法包括经典柱色谱、制备薄层色谱和高效液相色谱等。 1）经典柱色谱： 一般采用硅胶或者酸性及中性氧化铝作为固定相，常用石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、氯仿-丙酮和氯仿-甲醇等为流动相。同时，可以结合葡聚糖凝胶Sephadex LH-20的色谱柱，用氯仿-甲醇等为洗脱剂对香豆素类化合物进行分离和纯化。 2）制备薄层色谱： 是分离纯化香豆素类化合物的方法之一。其固定相和流动相的选择，可以参考柱色谱。 3）高效液相色谱： 目前，利用高效液相色谱来分离香豆素类化合物已经非常普遍，如果是分离极性小的香豆素类，一般用正相高效液相色谱，固定相是硅胶，流动相用石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、氯仿-丙酮和氯仿-甲醇等有机溶剂系统；而对于极性较大的香豆素苷类的分离纯化，则用反相高效液相色谱。 四、香豆素的检识反应： 1）荧光： 香豆素母体：无荧光 羟基香豆素：蓝色荧光（紫外）。（羟基香豆素类的极稀水溶液发生蓝色荧光，加氨后呈黄色荧光） 7 ― OH香豆素：蓝色荧光（强） 7，8 ― OH香豆素：荧光极弱或无 2）香豆素的显色反应 （1）异羟肟酸铁反应： 是在碱性条件下，香豆素类化合物的内酯环打开，与盐酸羟胺缩合，生成异羟肟酸。异羟肟酸在酸性条件下再与Fe3+络合呈现红色。 （2）三氯化铁反应： 具有酚羟基取代的香豆素类化合物，可以与诸如三氯化铁等多种酚类试剂呈现颜色反应。 （3）香豆素类化合物的Gibbs反应： 如果酚羟基的对位无取代，或者6位碳上无取代的香豆素衍生物，可以和Gibbs试剂呈现颜色反应，生成蓝色化合物。 ①Gibbs试剂――2，6-二溴（氯）苯醌氯亚胺，可与酚-OH对位的活泼氢缩合，生成蓝色化合物。 Gibbs反应要求必须有游离的酚-OH，且此酚-OH的对位要无取代才呈阳性反应。 7-OH香豆素对位无活泼H， 因此，7-OH香豆素Gibbs反应，就呈阴性反应 （4）*香豆素6-位有无取代基的确定： 将待测香豆素，先行水解，而后加Gibbs试剂： 呈（+），则6-位无取代基； 呈（-），则6-位有取代基。 3）NaOH- HCI反应，检验内酯、香豆素类化合物： 取试品的乙醇液2m1，加1％NaOH液1m1，于沸水浴上加热10分钟(若有沉淀过滤除去)，于澄明液中加2％HCI液酸化后，溶液变混浊，为内酯、香豆素类反应。 注：可同时取醇浸液2m1，不加试剂对照观察 五、香豆素的生物活性： （一）毒性： 长期以来因为香豆素的芳甜气味，被广泛用作食品和药品的香料。但它对肝的毒性作用很大。如黄曲霉素在极低的浓度就可以使动物的肝脏癌变。 （二）抗病毒作用: 从蛇床子等植物中得到的蛇床子素可抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。 （三）抗肿瘤作用: 7-羟基香豆素可抑制癌细胞的增殖，从而对肾癌和前列腺癌等起效。 （四）抗骨质疏松作用： 蛇床子素，对于骨细胞的增殖和骨胶原合成，具有显著的促进作用。 （五）抗凝血作用： 双香豆素的有些类似物，有防止血栓的形成或者起到溶栓功效，如海棠果内酯具有显著的抗凝血作用。 （六）对心血管系统的作用： 如前胡丙素，可降压和防止血管肥厚的作用。 （七）光敏作用： 许多香豆素类衍生物，具有光敏活性。如杭白芷总香豆素类，可以提高皮肤对于紫外线的敏感性，产生较多的黑色素。也可以用来治疗牛皮癣等皮肤病。 六、含香豆素中药实例： 秦皮： 功效：清热燥湿，凉肝明目等。 主治：痢疾，崩带等。 来源：木犀科，大叶白蜡树及白蜡树树皮。 大叶白蜡树树皮中，主要含：七叶内酯和七叶甙。 从秦皮中提取七叶苷 和七叶内酯的流程.