GRP78 BiP (HSPA5)靶点介绍及实验小贴士 |
您所在的位置:网站首页 › 内质网应激bip下调 › GRP78 BiP (HSPA5)靶点介绍及实验小贴士 |
您可点击此处下载GRP78 BiP (HSPA5)靶点介绍及实验小贴士pdf文件。
图一:GRP78 BiP靶点蛋白结构。图片来源:SWISS-MODEL。GRP78 BiP靶点介绍蛋白功能蛋白特性蛋白定位异构体 & 翻译后修饰WB实验贴士注意事项阳性对照结果示例关键控制点参考文献GRP78 BiP靶点介绍蛋白功能 可能在促进内质网上的多聚蛋白复合物的组装中起作用。 通过与DNAJC10的相互作用,参与蛋白质的正确折叠,同时,可能是为了促进DNAJC10从底物中释放出来, 还会参与错误折叠蛋白的降解过程。 蛋白特性类风湿性关节炎的自身抗原。 蛋白定位GRP78 BiP定位于细胞质,内质网腔,黑素体,细胞表面。 图二:GRP78 BiP ICC实验结果图,Anti- GRP78 BiP 抗体 [EPR21226] (ab213258)。HeLa细胞用5ug/ml Brefeldin A处理细胞30 min。绿色:GRP78 BiP,红色:Tubulin,蓝色:DAPI。异构体 & 翻译后修饰人(P11021):72kDa(预测) 小鼠(P20029):72kDa(预测) 大鼠(P06761):72kDa(预测) 存在乙酰化,磷酸化修饰等 回到顶部 WB实验贴士注意事项GRP78 BiP蛋白在不同细胞系和组织之间的表达量存在差异;使用Tunicamycin处理会提高部分细胞中检测到的蛋白信号强度,如HeLa, MCF, MEF, HUVEC, Raw 264.7等。所以,建议内源表达较低的细胞样本尝试使用Tunicamycin处理。 阳性对照细胞系:HeLa、 HepG2细胞裂解液。 组织:小鼠、大鼠肝脏裂解液。 结果示例图三:WB-Anti-GRP78 BiP 抗体[EPR4041(2)] (ab108615)。泳道1:15 µg HeLa全细胞裂解液泳道2:15 µg 10µg/ml衣霉素处理12h 的HeLa全细胞裂解液泳道3:15 µg MCF-7全细胞裂解液泳道4:15 µg 10µg/ml衣霉素处理48h 的MCF-7全细胞裂解液泳道5:15 µg MEF全细胞裂解液泳道6:15 µg 10µg/ml衣霉素处理48h 的MEF全细胞裂解液一抗:Anti-GRP78 BiP 抗体[EPR4041(2)] (ab108615),浓度 1/1000 稀释。二抗:HRP标记的山羊抗兔二抗(ab97051),浓度 1/20000 稀释。预测条带大小:72 kDa关键控制点 在实验中除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点: 样本制备 添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。 整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。 通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。 电泳 建议使用阳性对照。 转膜 建议转膜完成后使用丽春红染色,确定转膜是否成功。 抗体孵育 请根据产品说明书选择合适的抗体工作浓度。 回到顶部参考文献Wan-Chi Lin, Yu-Chi Chuang, Yung-Sheng Chang, Ming-Derg Lai, Yen-Ni Teng, Ih-Jen Su, Clay C C Wang, Kuan-Han Lee, Jui-Hsiang Hung. Endoplasmic reticulum stress stimulates p53 expression through NF-κB activation. PLoS One. 2012;7(7):e39120. doi: 10.1371/journal.pone.0039120. Epub 2012 Jul 30.Jie Wang, Jessica Lee, David Liem, Peipei Ping. HSPA5 Gene encoding Hsp70 chaperone BiP in the endoplasmic reticulum. Gene. 2017 Jun 30;618:14-23. doi: 10.1016/j.gene.2017.03.005. Epub 2017 Mar 7.D T Ng, S S Watowich, R A Lamb. Analysis in vivo of GRP78-BiP/substrate interactions and their role in induction of the GRP78-BiP gene. Mol Biol Cell. 1992 Feb;3(2):143-55. doi: 10.1091/mbc.3.2.143. |
今日新闻 |
点击排行 |
|
推荐新闻 |
图片新闻 |
|
专题文章 |
CopyRight 2018-2019 实验室设备网 版权所有 win10的实时保护怎么永久关闭 |