当我们进行实时荧光定量PCR测定某个基因表达量时，通常会选择内参基因作为参照，但很多人对于内参的认知仅仅停留在表达量相对较高、较稳定的管家基因，很少会去思考不同内参基因有何区别，以及到底怎么根据物种、组织挑选合适的内参。

初学者一般由导师提供或实验室共用同一个内参基因，导致qPCR实验出现实验组和对照组内参基因表达量出入很大，甚至论文送审后审稿人直接指出该实验所用内参基因不合适的情况。本文将针对内参基因表达量为何相对稳定，以及不同样本到底如何挑选内参等问题作详细探讨。

假设实验组和对照组的某目的基因Ct值分别为18、19，根据表达量公式，能判定实验组该基因表达量为对照组2倍吗？并非如此，如果实验组样本的数据来自1000个细胞，对照组来自250个细胞，那实际实验结果应当相反——对照组表达量是实验组的2倍。

因此除非样本的数量、RNA抽提、逆转录、qPCR扩增效率完全一致，且保证实验过程中不存在操作误差，才能直接根据Ct值判定某基因的表达量水平，而这几乎不可能实现。

绝对定量可以利用标准曲线确定初始模板的拷贝数，而相对定量也需要一个较稳定的参照作为标尺，因此引入内参基因来实现样本处理归一化，可对提取的样本量、细胞上样及实验过程中存在的实验误差进行校正。

为什么内参基因表达水平相对稳定

相信很多人都知道相对定量需要引入内参基因作为参照，但可能会产生疑问，不同处理下的内参基因表达水平为什么都相对稳定？为什么同一个内参基因在不同物种都通用？

这是由于这些内参基因一般是维持细胞最低限度功能所需的基因，如组蛋白编码基因、核糖体蛋白编码基因、线粒体蛋白基因等。常用的内参基因通常是各种管家基因（house-keeping genes），通常高度保守且在大多数情况下持续、稳定表达于不同类型的细胞和组织中，表达水平一般不受任何内源性与外源性因素的影响，其产物是维持细胞基本生命活动所必需蛋白，如β-肌动蛋白 (β-Actin)、微管蛋白 (Tubulin) 和甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH) 等。

即使这些管家基因与其他分子的合成相比，通常表达量波动很小，但大量研究表明，即使是维持细胞基本生命活动的这些基因，它们的表达在特定处理时可能发生很大变化，或在不同组织下表达量相对较低，因为管家蛋白不仅与基底细胞代谢有关，可能还涉及参与其他功能。

那么针对不同样本，如何挑选符合以上条件的合适的内参基因？

Table 1 不同物种组织内参基因表达稳定性检索表

Table 2 不同细胞器中常见内参基因一览表

另外还可以根据内参基因知识库——ICG数据库(http://icg.big.ac.cn/index.php/Main_Page)，查询各种物种合适的内参基因，该数据库对经生物学实验手段鉴定出的内参基因，及其应用实验实现了有效的挖掘、整合及注释。

1.首页介绍了目前该数据库排名前10的内参基因，以及所收录的物种、内参基因、实验处理条件等信息。

2. 这里以“Rabbit”为例，搜索后就能看到“Rabbit”应用到具体某个实验中所用到的具体内参基因详细信息。

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