仅供科研实验研究使用，严禁用于临床诊断!  l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中  人血清白蛋白（HSA）  。 l有效期：6个月 l保存条件：2-8℃ [实验原理] 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被   人血清白蛋白（HSA）  捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的      呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 [样本处理及要求] 1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 [需要而未提供的试剂和器材] 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 4.蒸馏水或去离子水 [试剂盒组成]

备注： 1.  标准品浓度依次为：12、6、3、1.5、0.75、0.375 ng/mL 2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。 [注意事项] 1、试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4、使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6、洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7、底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8、加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9、按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 [试剂准备] 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 [操作步骤] 1、使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。 2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。 3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。 4、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。 6、甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 7、每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。 8、取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。 9、在450nm波长处测定各孔的OD值。 [实验结果计算] 以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。 [试剂盒性能] 1. 检测范围：0.375 ng/mL – 12 ng/mL。 2. 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/mL。 3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。