预期实验结果图

图1 比靶标蛋白分子量小的位置出现多条条带

图2 比靶标蛋白分子量大的位置出现多条条带

图3 不同分子量大小的位置出现多条条带

图4 检测条带小于预期分子量大小

图5 检测条带大于预期分子量大小

当WB实验出现检测条带与预期不符或者多条带等现象时，我们归纳整理发现，主要是由于样本和靶标自身特性以及WB实验流程中的样本制备、抗体孵育和封闭等具体实验细节问题所引起的，接下来将详细介绍一下出现检测条带与预期不符及多条带等现象的原因及具体解决方案，一起来看看吧！

1. 细胞传代次数过多，使其蛋白表达不同，导致检测条带大小与预期不符或多带现象。

可通过如下建议解决：

2. 蛋白样本降解，导致检测蛋白质分子量降低或多带现象。

可通过如下建议解决：

3. 体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式如乙酰化、甲基化、烷基化、磷酸化和糖基化等，导致检测条带大小与预期不符或多带现象。

可通过如下建议解决：

以部分热门靶标为例，欢迎点击上方“附录5”链接查看全部靶标信息

以部分热门靶标为例，欢迎点击上方“附录6”链接查看全部靶标信息

4. 靶标蛋白含有多个异构体或剪切体，导致检测条带大小与预期不符或多带现象。

可通过如下建议解决：

以部分热门靶标为例，欢迎点击上方“附录4”链接查看全部靶标信息

注：

（1）有些特殊蛋白，由于翻译后修饰、剪切或降解等因素影响，WB实际检测分子量大小可能与预测不符，或有弥散现象。

（2）有些蛋白可能有多个异构体，因此WB检测时可能会有多带现象。

（3）同一蛋白的多个异构体表达模式可能不同，即不同样本中，未必都能检测到同一蛋白所有的异构体。

5. 检测到未经报道过的新蛋白或同一蛋白家族中具有相似表位而结构不同的蛋白。

可通过如下建议解决：

样本制备

靶蛋白形成多聚体

可通过如下建议解决：

封闭

条带为非特异性条带

可通过如下建议解决：

一抗孵育

一抗浓度过高，高浓度时常出现多条蛋白带

可通过如下建议解决：

抗体未经纯化

可通过如下建议解决：

二抗孵育

二抗浓度过高，高浓度产生非特异性结合

可通过如下建议解决：

下一期，我们将把目光集中到WB出现高背景和其他问题（除无信号、条带问题外），并给大家提供原因分析和优化方案，记得来围观哦。