T4/T8比值正常指标,T4/T8比值临床意义 |
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(1)直接免疫荧光法: ①取肝素抗凝外周血,用淋巴细胞分层液获得单个核细胞,Hank液配成(1~2)×106细胞/ml。 ②取1ml细胞悬液加入5ml塑料管中,离心2000r/min,2min,弃上清。 ③加FITC-CD4、FITC-CD8各20μl,对照管加mIgG-FITC,4℃反应30min。 ④Hank液洗2次,2000r/min,2min。 ⑤流式细胞计分析。 (2)间接免疫荧光法: ①分离PBMC,调至(1~2)×106细胞/ml。 ②取1ml细胞悬液于5ml塑料管中,离心2000r/min,2min,弃上清。 ③加抗CD4、CD8单克隆抗体各100μl,对照管加抗体稀释液或正常小鼠IgG,4℃反应30min。 ④Hank液洗2次,离心2000r/min,2min,弃上清。 ⑤各加50μl FITC-IgG,4℃反应30min。 ⑥Hank液洗2次,2000r/min,2min。 ⑦滴片,荧光显微镜观察或流式细胞计分析。 |
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