96孔板测定示例

概述

SOD标准品或测试样品（50μL）

添加SOD测定混合物（25μL）

添加酶反应混合物（25μL）

在室温下孵育10-30分钟读取560 nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，将所有试剂盒组分解冻至室温。

操作方法

1.Parepare系列SOD（0至100 U / mL）标准溶液：

1.1将50μL测定缓冲液（组分E）加入到SOD标准品（组分D）的小瓶中以制备10kU / mL SOD储备溶液。

注意：未使用的SOD溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

1.2在990μL分析缓冲液（组分E）中加入10μL10kU / mL SOD溶液，得到100 U / mL SOD溶液。取100μL的100 U / mL SOD溶液进行1:10连续稀释，然后进行1：3稀释，得到10,3,1,0.3,0.1,0.03 U / mL SOD标准溶液。

1.3如说明书中表1和2所述，将SOD标准品和含SOD的测试样品添加到96孔白壁/透明底或透明微孔板中。

2.Parepare SOD测定混合物1：

2.1将2.5 mL测定缓冲液（组分E）加入ReadiView SOD560（组分A）瓶中，充分混合。

2.2将50μL50X黄嘌呤（组分B）加入组分A（来自步骤2.1）的瓶中以制备SOD测定混合物。

注意：SOD测定混合物应在实验前准备好，避光。 测定混合物不稳定，应丢弃未使用的部分。

3.Parepare SOD测定混合物2：

3.1将50μL测定缓冲液加入到黄嘌呤氧化酶（组分C）的小瓶中，并将50μL黄嘌呤氧化酶原液转移到2.5mL测定缓冲液（组分E）中以制备SOD测定混合物2，充分混合。

3.1将25μLSOD测定混合物1（来自步骤2.2）添加到SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤1，说明书表1和2）。

3.2将25μLSOD测定混合物2（来自步骤3）加入SOD标准品，空白对照和测试样品（来自步骤4.1）的每个孔中。

注意：对于384孔板，将25μL样品，12.5μLSOD测定混合物1和12.5μLSOD测定混合物2加入每个孔中。

3.3在室温下孵育30-60分钟。

3.4监测550至560nm的吸光度强度。

参考文献

Intercomparative investigation of the total phenols, total flavonoids, In vitro and In vivo antioxidant activities of capparis Cartilaginea (Decne.) maire and weiller and Capparis Ovata Desf. from JordanAuthors: Mahmoud A Al-Qudah, Safwan M Obeidat, Riyadh Muhaidat, Bahaa Al-Trad, Hala I Al-Jaber, Jamil N LahhamJournal: Pharmacognosy Magazine (2018): 154

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