我们给大家汇总了 PCR 常见问题、出现的原因及解决对策，还有终极解决方案。

　　PCR 常见问题及解决方案

　　1没有扩展条带

　　可能的原因及对应的解决方案如下：

　　 酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。

　　 模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成 DNA 脱嘌呤而影响 PCR 的结果。

　　 变性温度是否准确：PCR 仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几个循环就迅速失活；过低则模板变性不彻底。

　　 反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶，应在未加 Taq 酶以前，将反应体系 95℃ 加热 5~10 分钟。

　　 引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化，或因储存条件不当而失活。

　　 引物错误。利用 BLAST 检查引物特异性或重新设计引物。

　　 DNA 凝胶电泳时加入阳性对照，确保不是 DNA 凝胶和 PCR 程序的问题。

　　2PCR 产物量过少

　　可能的原因和对应的解决方案如下：

　　 退火温度不合适。以 2 度为梯度设计梯度 PCR 反应优化退火温度。

　　 DNA 模板量太少。增加 DNA 模板量。

　　 PCR 循环数不足。增加反应循环数。

　　 引物量不足。增加体系中引物含量。

　　 延伸时间太短。以 1 kb/分钟的原则设置延伸时间。

　　 变性时间过长。变性时间过长会导致 DNA 聚合酶失活。

　　 DNA 模板中存在抑制剂。确保 DNA 模板干净

　　3扩增产物跑电泳条带弥散

　　可能的原因和对应的解决方案如下：

　　 酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。

　　 dNTP 浓度过高。减少 dNTP 的浓度。

　　 MgCl₂ 浓度过高。可适当降低其用量。

　　 模板量过多。质粒 DNA 的用量应