例如：

模板ＤＮＡ在９４℃条件下变性形成单链； 在５５℃条件下根据目的基因两侧序列设计的引物分别与其同源序列结合；７０℃下在耐热性ＤＮＡ聚合酶Taq 酶催化下， 在４种dNTP存在条件下延伸形成双链。完成一次循环。 接着又以新合成的ＤＮＡ为模板进行同样反应，如次往复循环３０次，由于每次循环目标ＤＮＡ都以２n次幂扩增，３０次循环后目的DNA的量增加１０６－７倍。成功的ＰＣＲ反应要求反应有很好的特异性，和相当的扩增效率。

DNA模板

纯度：蛋白、多糖、酚类等杂质会抑制PCR反应

完整性： 模板降解会导致PCR扩增无产物

浓度： 加量过多导致非特异性扩增增加

引 物

特异性：长度适当、避免二级结构和二聚体

完整性：避免反复冻融

浓度：应适当,过高导致非特异性增加,过低则扩增产物太少

三、反应体系对PCR扩增的影响

四、材料、设备及试剂

设备 ：eppendorf管、微量取液器， 台式 高速离心机， 电泳仪、电泳槽、UVP凝胶成像系统、PCR仪

试剂：16SrDNA引物、细菌基因组DNA、Taq Plus、dNTP、 PCR 反应缓冲液、琼脂糖 、TAE电极缓冲液、Lamdar DNA/HindⅢ 、EB 、 加样缓冲液

五、操作步骤

（一）、PCR反应

1. 依次混匀下列试剂

5μl 10×PCR反应缓冲液

1μl 4种dNTP

2μl 上游引物（引物１）

2μl 下游引物（引物２）

1μl 模板DNA

0.5μl Taq DNA聚合酶

38.5μl H2O

混匀后离心5秒。

（二）扩增：用94℃变性3分钟， 94℃变性1分钟，61℃退火1分钟, 72℃延伸1分钟, 循环30轮,进行PCR。最后一轮循环结束后, 于72℃下最后延伸5分钟，使反应产物扩增充分。

（三）电泳鉴定：方法同实验二（2%琼脂糖凝胶）

六、PCR常见问题分析

问题一：无扩增产物

现象：正对照有条带，而样品则无；

问题二：非特异性扩增

现象：PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。

问题三：拖尾

现象：产物在凝胶上呈Smear状态。

问题四：假阳性（筛选转基因、检测基因表达情况)

现象：空白对照出现目的扩增产物