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623

作者：

于婷，宋小红，付玲，侯利华

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摘要：

目的:建立并优化用于检测神经生长因子(NGF)生物学活性的 TF-1细胞增殖法,并应用于重组人 NGF 和鼠NGF 制品的活性检测.方法:将梯度稀释的人 NGF 国际参考品与 TF-1细胞相作用,通过 MTT 法测定细胞增殖情况,建立测定 NGF 活性的 TF-1细胞增殖法;从粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)残留,NGF 加样稀释率,TF-1细胞接种浓度,培养时间等多个环节对实验条件进行优化;将建立的 TF-1细胞增殖法应用于重组人 NGF 和鼠 NGF 的活性检测.结果:建立了用于 NGF 活性检测的 TF-1细胞增殖法;实验条件优化结果表明,在无 GM-CSF 残留的情况下,将稀释至1/4的 NGF 样品与4×105/mL 的细胞相互作用,培养48 h,可以得到更为典型的的四参数曲线;利用条件优化后建立的检测方法对重组人 NGF 和鼠 NGF 各2批样品分别进行4次测定,结果平均值分别为10.01×105,10.81×105和3.55×105,3.30×105 U/mg,变异系数分别为7.5%,7.2%和7.2%,9.1%,检测结果稳定均一,表明检测方法具有很好的重复性.结论:建立并优化了用于 NGF 活性检测的 TF-1细胞增殖法,该方法操作简便,定量准确,重复性好,稳定可靠,可有效应用于人 NGF 和鼠 NGF 制品的活性检测.

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关键词：

TF-1 细胞 神经生长因子 生物学活性

DOI：

10.3969/j.issn.1009-0002.2012.06.017

被引量：

10

年份：

2012