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干货|最基础的高效液相色谱法知识!看完记得收藏!

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高效液相色谱法(HPLC)具有高压、高效、高速、高灵敏度、高选择性等特点,广泛应用于医药、环保、石化、食品、化工等行业,是现在分离分析的重要方法,本文着重介绍HPLC的工作原理、基本组成及高效液相色谱名词术语,使新学者快速了解高效液相色谱知识,在日常操作中理论与实践结合,确保HPLC的高效运行、快速分析。

1,HPLC工作原理

100多年前俄国植物学家Tswett(茨维特) 他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下,结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带,Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的实验方法,即现在的Chromatography(色谱法)。

Tswett(茨维特)色谱实验

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色谱法是通过是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解、分配、吸附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离,色谱法的本质是分离分析方法。

色谱分离原理

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两相中的一相是固定的,叫作固定相(Stationary Phase),一相是流动的,叫作流动相(Mobile Phase),又叫洗脱剂。用液体作为流动相的,即为液相色谱(Liquid Chromatography, LC)。

HPLC为High Performance Liquid Chromatography的缩写(High高、Performance性能、Liquid液体的、Performance 色谱),是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段,具有高压、高效、高速、高灵敏度、高选择性等特点。

2,HPLC分类

按固定相和流动相的相对极性分为正相色谱(NormalPhaseChromatography)和反相色谱(Reversed Phase Chromatography)。

正想色谱:固定相的极性大于流动相。

反相色谱:固定相的极性小于流动相。

有机化合物极性是指分子间作用力(静电引力、偶极力、色散力、氢键力)综合表现的一种表述。



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